双抗体夹心ELISA检测水牛γ-干扰素方法的建立及初步应用.pdfVIP

• 10. 却让mal Husban世y Veterinary Medicine 2012 VoL44 No.6 双抗体夹心 ELISA 检测水牛γ·于扰素方法的 建立及初步应用 徐贤坤l 气熊毅1 ，刘棋3\ 曾宪垠2\ 龙剑明4 (1.广西动物疫病预防控制中心，广西南宁 53侃lOl ; 2. 四川农业大学生命理学院，四川雅安 625014 , 3. 广西水产畜牧兽医局，广西南宁 53∞22; 4. 广西大学动物科学技术学院，广西南宁 53α盼到 摘要:纯化2 株针对水牛?干扰素的单克隆抗体，其中1 株进行H盯标记作为检测抗体，另 1 株单抗作为捕获抗体，建立检测水牛干干扰素的 双抗体夹心EU5A (DA5-EUSA) 。通过对封闭液、抗体稀释液等条件进行优化，经过方阵滴定试验确定捕获抗体的最佳浓度为625 略/此，检测 抗体的工作效价为 1: 1∞;所建立的 DAS-EUSA 方法检测灵敏度25 nmL. 批内变异系数为0.52% -6.86%. 批间变异系数为5.6% -7.07% 。 采集ω头单次皮内注射结核菌素的水牛肝素销抗凝全血，利用牛结核抒菌特异性抗原rH自-CFPIO/ESAT-6 融合蛋白体外剌激外周血淋巴细胞释 放 IFN-Y.用所建立的夹心 EUSA 检测所有样本，与皮内变态反应试验比较，结果显示，自制夹心 EUSA 方法检测水牛结核病的敏感性为62% ， 特异性为87% ，符合率为75% ，表明可应用于水牛结核病的检测。 关键词:结核病， IFN-(; E山A; ESAT-6/CFP-IO; 单克隆抗体 中圈分类号: 5855.2 文献标识码:A 文章编号: 0529-5130(2012)06-∞10-07 收稿日期: 2011-11-23; 修回日期: 2012-03-27 ，通讯作者:刘棋，研究员，主要从事动物传染病学研究， E- 皿皿1: Iqzz888@ 田na. com; 曾宪垠，研究员，主要从事为动物免疫调控 基金项目:广西科技厅科技攻关项目(桂科攻07刷刷-3F). 方面的研究， E-mail: 却回唱@回回u. edu. cn。 作者简介:徐贤坤 (1980. )，女，高级兽医师，博士。 179-185. [10J 李育祷，杜立新.中国荷斯坦牛催乳素基因型与产奶性状的相 参考文献: 关分析[J]. 山东农业大学学报2 自然科学版， 2α间， 35 (4): 553-555. [1] 苗永旺，李大林，霍金龙，等.中国水牛的遗传多样性与起源 [ 11 ] Chrenek P , Huha J ，伽町cov. M. Genotype of bGH 田td bPRL gen国