多步骤诱导逐步筛选法建立高效的胚胎干细胞定向分化为胰岛祖细胞的分化方案.pdfVIP

西安交通大学学报(医学版〉 Vo I. 32 No.4 第32 卷第4 期 201 1 年 7 月 Journal of Xian Jiaotong University( Medical Sciences) Ju I. 2011 多步骤诱导逐步筛选法建立高效的胚胎于细胞 定向分化为膜岛祖细胞的分化方案 隋蜻1·2 ，姜方旭2 ，施秉银l (1.西安交通大学医学院第一附属医院内分泌科，陕西西安 710061 ; 2. 澳大利亚西澳大学医学研究院糖尿病研究中心，澳大利亚瑞斯 6000) 摘要:回筒 探讨胚胎干细胞(ESCs)体外定向分化为膜岛祖细胞的分化潜能，应用多步骤诱导逐步筛选法建立高效 的胚胎干细胞定向分化为膜岛祖细胞的分化方案，提高胚胎干细胞向膜岛祖细胞分化的效率。方蜂 体外传代培养 ESCs ，采用逐步筛选分化方案，在不同的分化阶段，给予不同的生长因子诱导分化后，RT-PCR 法检测膜腺特异性基 因的表达，筛选最佳的诱导因子组合，并用免疫细胞化学方法鉴定相关特异蛋白的表达，从而建立体外高效的定向分 化方案。结果 从未分化 ESCs 定向分化为定形内胚层细胞，以活化素 A 诱导组的Sox17 和 Foxa2 基因表达最显著p 从定形内胚层细胞分化到后前肠细胞，以维甲酸+FGFI0 诱导组的 Hnf4a 和 Hnf6 基因表达最显著;从后前肠细胞定 向分化到膜腺内胚层细胞.以维甲酸+环把明+DAPT + Exendin 4 诱导组的 Pdxl 、 Ptf1 a、 Hblx9 等膜腺特异性基因 表达最显著;从膜腺内胚层细胞定向分化到膜岛祖细胞，以维甲酸+DAPT十 Exendin 4 诱导组的 Ngn3 、 Nkx6.1 、 Pax4 、 Pax6 等基因表达最显著。免疫细胞化学方法检测可见膜腺特异性的相关蛋白表达，多数 Ngn3+ 细胞同时表达 膜腺特异性基因 Nkx6.1 和 Pdxl 。结檐 应用多步骤诱导逐步筛选法可以建立高效的 F-SCs 定向分化为膜岛祖细胞的 分化方案.提高 ESCs 向膜腺内胚层分化的分化效率，为 1 型糖尿病的自细胞再生治疗提供试验依据和可行性方案。 关键词:胚胎于细胞g 膜腺分化;腕岛祖细胞g 转录因子g 多步骤诱导逐步筛选法g 分化方案 申图分类号:R335. 6;R329. 2 文献标志码:A 文章编号: 1671-8259(2011 )04-0407 -07 A highly efficient stepwise selective pancreatic endocrine differentiation strategy from mouse embryonic stem cells in vitro 2 1 SUI Jing 1.2 , ]lANG Fang-xu , SHI Bing-yin (1. Department of Endocrinology , the First Affiliated Hospital , Medical School of Xian Jiaotong University , Xian 710061 , China; 2. Center for Diabetes Research , Western Austra