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摘 要
纳豆激酶(Nattoldnase，NK)是由纳豆芽孢杆菌(Bacillus
natto)分泌的一种具
有强纤溶活性的丝氨酸蛋白酶。体内外实验证明该酶能显著溶解体内外血栓，明
显缩短纤维蛋白的溶解时问。纳豆激酶经口服后可迅速入血，纤溶活性强，作用
时间长，具有安全性好、口服有效等优点。
本实验对来源于纳豆芽孢杆菌的纳豆激酶基因进行了以下几个方面的研究
工作：
1．采用CTAB法从纳豆芽孢杆菌中提取基因组DNA，聚合酶链式反应(PCR)
EcoRI、Sal
I双酶切后，用T4DNA连接酶连接来构建重组表达载体。将鉴定
合层析纯化目的蛋白，SDS．PAGE结果显示表达产物分子量约为28KD。
2．以纯化的重组蛋白免疫家兔制备了纳豆激酶多克隆抗体，经辛酸．硫酸铵
blot结果显示在约28KD处有一特异性条带。方阵滴定法测得抗原最适包被浓度
为20ug／ml。
3．将纯化后的纳豆激酶抗体用辣根过氧化物酶标记，建立了双抗体夹心酶
联免疫法来检测纳豆激酶浓度。以纳豆激酶标准品制备了标准曲线，精密度试验
结果良好，回收率测定结果表明检测方法的回收率约为91％～102％。
4．采用酶联免疫吸附反应法(ELISA)研究了纳豆激酶(NK)静脉给药后在
家兔体内的药代动力学参数。所测得纳豆激酶在家兔体内的药时曲线符合二室模
型，权重为1／C2。纳豆激酶在家兔体内的主要药动学参数为：分布相半衰期T1／2
a(min)为24．41±3．13；消除相半衰期T1／2B(min)为123．67±5．96；药物清除
5450．34+400．41。
关键词：纳豆激酶基因 蛋白表达 大肠杆菌 多克隆抗体药代动力学
Abstract
a thatisexcretedfromBacillus
Nattokinase(NK)isfibrinolyticenzyme natto．
In andin results thatNattokinasecan
vitro vivo showed
experimental hydrolyze
thrombus and the timeoffibrin．Nattokinaseisfastand
reduce
significantly lysis easy
tObeabsorbedandhas effectonthrombosis．
body
by persistent
The of oftheNattokinaseandrelatedworkswere
studyexpression gene reported
inthiswork．
and of NattokinaseofBacillus
1．Cloningsequencinganalysisgeneencoding
DNAwas
Subtilis(natto)wereperformed．BacillusSubtilis(natto)geneticprepared
withCTABmethod．The was PCR．TheNatterkinaseand
targetgene gotten
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