邻苯二甲醛_OPA_法快速测定蛋黄粉中的胆固醇含量.docxVIP

白利，王瑞雪，王际辉，钱方*（大连工业大学生物与食品科学工程学院，辽宁大连116034）摘要：研究用邻苯二甲醛（OPA）法测定蛋黄粉中胆固醇含量。结果表明，OPA法变异系数为2.89%，精密度高，回收率较高，适于胆固醇含量的快速测定，具有操作简单、方法稳定等特点。同时，用甲醇氯仿法提取胆固醇，方法准确、简单易行。关键词：邻苯二甲醛法；胆固醇；测定中图分类号：O656.3文献标识码：A文章编号：0254-5071（2010）05-0162-02Rapiddeterminationofthecholesterolconcentrationinyolkpowderbyo-phthaldialdehyde(OPA)methodBAILi,WANGRuixue,WANGJihui,QIANFang*(SchoolofBioandFoodTechnology,DalianPolytechnicUniversity,Dalian116034,China)Abstract:Contentsofcholesterolofeggyolkpowderwasdeterminedbyo-phthalalehpyde（OPA）method.Theresultsindicatedthatthevariationcoefficientofthemethodis2.89%,whichhashighprecisionandrecovery.Themethodissimpleandstable,anditissuitableforrapiddeterminationofcholesterol.Extractionofcholesterolbymethanol-chloroformisaccurateandfeasible.Keywords:o-phthaldialdehyde;cholesterol;determination目前，胆固醇的定量分析方法主要有比色法、酶法、气相色谱法和高效液相色谱法。其中酶法技术含量较高，特异性较强，而气相色谱和高效液相色谱法需特殊设备，均难以推广使用[1]。相比之下，比色法较为快速方便。比色法测定胆固醇含量包括高氯酸显色法、邻苯二甲醛比色法、磷硫铁比色法和硫酸铁铵比色法[2]。本实验主要研究用邻苯二甲醛法快速准确测定蛋黄粉中的胆固醇含量。1实验原理邻苯二甲醛显色法反应即羟醛反应法：邻苯二甲醛有两个醛基（-CHO），胆固醇的C3位上有一个羟基，二者在浓硫酸作用下产生紫红色物质，在波长550nm处有最大吸收值[3]。2材料和方法2.1主要试剂胆固醇：沈阳试剂五厂；邻苯二甲醛：金坛金丰化工有限公司；蛋黄粉：大连生化制品有限公司；冰乙酸：天津天河化学试剂厂；浓硫酸：公主岭化学试剂厂。2.2试剂配制胆固醇标准液（1mg/mL）：胆固醇100mg溶于冰乙酸定容至100mL。邻苯二甲醛试剂（OPA）：邻苯二甲醛10mg，溶于冰乙酸定容至100mL，避光保存。蛋黄粉溶液（10mg/mL）：（1）水溶法：0.1000g蛋黄粉溶解于10mL热水。（2）有机溶剂法：0.0100g蛋黄粉用1mL甲醇氯仿溶液（甲醇∶氯仿=2∶1）溶解过滤，滤液进行分析检测。2.3实验仪器722型光栅分光光度计：山东高密彩虹分析仪器有限公司。2.4实验方法2.4.1胆固醇标准曲线的制作按表1进行胆固醇标准曲线的绘制。表1OPA法测定胆固醇的标准曲线绘制的设计Table1.StandardcurveofcholesterolmeasuredbyOPA胆固醇标准液/μL01030507090冰乙酸/μLOPA/mL浓硫酸/mL4003903703503303101.51.0溶液配料时边加浓硫酸边振荡，充分混匀，室温静置10min，测OD550。2.4.2显色时间的确定胆固醇标准液60μL，加340μL冰乙酸、1.5mLOPA、1mLH2SO4，混合均匀，分别静置5min、10min、15min、20min、25min、30min、40min、50min、60min、70min、80min、90min后，取样测定OD550。2.4.3OPA方法的精密度实验取蛋黄粉0.100g，水溶法配制10mg/mL蛋黄粉液。平行样品4份，每份3个平行，每组测12例（n=12）。取蛋粉液100μL，加冰乙酸300μL，OPA1.5mL、浓硫酸1.0mL。充分振荡，混匀，室温静置10min，测定OD550。2.4.4OPA方法的回收率实验取4号样做回收率实验，加入胆固醇标准液，进行胆固醇含量测定。具体操作见表2。在实验中，充分振荡，混匀，室温静置10min，测定收稿日期：2009-12-29作者简介：白利（1982-）男，河北人，硕士研究生，研究方向为食品生物技术；钱方*，教授，通讯作者。2010