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青岛农业大学 动物基因工程课程论文 题 目： 姓 名： 学 院： 专 业： 班 级： 学 号： 任课教师： PCR技术的原理及应用 二〇一二年四月二十一日 PCR技术的原理及应用 摘要：PCR 技术即聚合酶链式反应，是一项伟大的发明，它使一度非常稀有的实验所需遗传物质变得丰富。 PCR技术是指在DNA聚合酶催化下，以母链DNA为模版，以特定引物为延伸起点，通过高温变性、低温退火（复性）及适温延伸等几步反应组成一个周期，循环进行，在体外复制出母链DNA互补的子链DNA过程。是一项DNA体外合成放大技术，能快速特异地在体外扩增任何目的DNA，可用于基因分离克隆，序列分析，基因表达调控，基因多态性研究等许多方面。 关键词： PCR技术；反应原理；反应体系；技术应用；专利技术 [1] ···1··· Principle and Application of Polymerase Chain Reaction Abstract： PCR is short for Polymerase Chain Reaction.PCR technology is a great invention which makes the rare genetic material in the experiments become more and more. [1]Under the catalysis of DNA polymerase, with mother-stranded DNA templates with specific primers for the extension of the starting point, by high-temperature denaturing, low temperature annealing ( renaturation ) and optimum temperature extension steps reaction to form a cycle, loops the process of the DNA copy in vitro replication of mother-stranded DNA complementary chains DNA. Amplification of a DNA synthesized in vitro, specifically rapid in vitro amplification of any target DNA can be used for gene isolation an cloning, sequence analysis, gene expression regulation, gene polymorphism in many ways. This article from the technical principle of the PCR technique, the reaction system, the application of the technology and the patent three aspects to be discussed. Key words: PCR technology；reaction principle；reaction system；application of technology；patented technology ···2··· 引言 PCR技术在基因工程领域已经得到广泛应用，为了进一步了解这项技术， 1 PCR技术简介 1.1 PCR技术的概念 PCR技术为Polymerase Chain Reaction 的简称，即聚合酶链式反应。是体外酶促合成特异DNA片段的一种方法，由高温变性、低温退火（复性）以及适温延伸等几个反应步骤形成一个周期，循环进行，使目的DNA得以迅速扩增，具有特异性强、灵敏度高、操作简便、快速、对标本的纯度要求低等特点。这项技术不仅仅可以用于基因分离、克隆和核酸序列分析等基础研究，还可以用于疾病的诊断或任何有DNA、RNA的地方。聚合酶链式反应又称无细胞分子克隆或特异性DNA序列体外引物定向酶促扩增技术。该技术已经使得世界研究古DNA序列以及那些现有存在物的序列成为可能，因此，在某一方面来讲，抓住了进化的杀手。[4] 1.2 PCR技术的发展简史 1.2.1 PCR的最早设想 核酸的研究已有100多年的历史，上世纪60年代末、70年代初人们致力于研究基因的体外分离技术，Korana于1971年最早提出核酸体外扩增的设想：“经过DNA变性，与合适的引物杂交，用DNA聚合酶延伸引物