第2章生物物理技术波谱技术1.docVIP

第2章 波谱技术 摘要: 光谱学作为生物物理学研究中相对成熟的研究手段，有着广泛的应用。本文对光谱学中的一些光谱技术及其应用做了简单介绍。 关键词：光谱学，紫外可见光光谱，荧光光谱，红外光谱 Abstract: As one of the important and mature biological physics research methods, Spectroscopy has an extensive application. This article raises a general introduction on some of the Optical Spectroscopy and its application. Key words: spectroscopy, Ultraviolet visible light spectrum, fluorescence spectroscopy, infrared spectroscopy 目录 1. 绪论 1 2. 波谱技术具体介绍 1 2.1 紫外可见光吸收光谱（UV-vis Spectroscopy） 2 2.1.1 紫外可见光分光光度计 2 2.1.2 紫外可见光光谱的应用 2 2.2 荧光光谱（Fluorescence Spectroscopy） 3 2.2.1 荧光光谱仪 3 2.2.2 荧光光谱的应用 3 2.3 荧光相关光谱（Fluorescence Correlation Spectroscopy） 4 2.3.2 荧光相关光谱的应用 4 2.4 荧光互相关光谱（Fluorescence cross-correlation spectroscopy） 5 2.5 拉曼光谱（Roman Spectroscopy） 5 2.5.1 拉曼光谱的优点 5 2.5.2 表面增强拉曼光谱 5 2.5.2 拉曼光谱的其他应用 6 2.6 红外光谱（Infrared spectroscopy） 6 2.6.1 红外光谱仪 6 2.6.2 红外光谱的应用 6 2.7 近红外光谱（Near-Infrared spectroscopy） 7 2.8 二维红外光谱（Two-Dimensional Infrared Correlation Spectroscopy） 7 3．结论 8 1. 绪论 光谱学是光学的一个分支学科，它主要研究各种物质的光谱的产生及其同物质之间的相互作用。光谱是电磁辐射按照波长的有序排列，根据实验条件的不同，各个辐射波长都具有各自的特征强度。光谱技术被人们广泛的应用于分子能级、电子组态、分子几何形状、化学键、物质检测等许多方面。 2. 波谱技术具体介绍 根据光谱技术的方法不同，一般把光谱学分为发射光谱学、吸收光谱学、散射光谱学三类。其中发射光谱学主要包括：原子发射光谱（AES）、原子荧光光谱（AFS）、X射线荧光光谱法（XFS）、分子荧光光谱法（MFS）等；吸收光谱学主要包括：紫外－可见光法（UV-Vis）、原子吸收光谱（AAS）、红外观光谱（IR）、核磁共振（NMR）等；散射光谱学主要是拉曼散射（Raman）。 下面将对主要的波谱技术逐一介绍。 2.1 紫外可见光吸收光谱（UV-vis Spectroscopy） 研究物质在紫外、可见光区的分子吸收光谱的分析方法称为紫外-可见分光光度法。紫外—可见分光光度法是利用某些物质的分子吸收200 ( 800 nm光谱区的辐射来进行分析测定的方法。这种分子吸收光谱产生于价电子和分子轨道上的电子在电子能级间的跃迁，广泛用于无机和有机物质的定性和定量测定。 2.1.1 紫外可见光分光光度计 紫外可见光分光光度计主要分为5大部件，分别是光源、单色器、样品室、检测室及显示设备。 2.1.2 紫外可见光光谱的应用 紫外可见光光谱可用于研究生物大分子。传统的生物学研究，利用含苯环的氨基酸（酪氨酸、色氨酸、苯丙氨酸）在紫外区的吸收峰来测定蛋白质的含量，主要有280nm法和280nm、260nm差法。同样，紫外可见光光谱还可应用于核酸研究，利用核酸在260nm的吸收峰可以测量核酸的量，而利用280nm和260nm的吸光度值，可以检测核酸的纯度。 文献报导牛血清白蛋白(BSA)水溶液在276 nm 和193 nm 有两个吸收峰（薛萍，et al.2002）。前者主要是蛋白质中酪氨酸、色氨酸的光吸收,后者主要是由肽基团的吸收而产生的。由紫外吸光谱的性质知,193 nm 附近的吸收峰是肽链α(螺旋和无规则卷曲构象的主要识别峰) ,而β(折迭构象型的吸收峰) 应在波长198 nm附近。故可推测此BSA 溶液中没有β(折迭构象或极少) 。 紫外可见光光谱也可以应用于纳米粒子的研究。如纳米银具有独特的光谱特性一些研究