嗜热子囊菌光孢变种β-葡萄糖苷酶的基因克隆-应用与环境生物学报.PDF

2009 15 4 ): 549~553 2009-08-25 应用与环境生物学报 ， ( Chin J Appl Environ Biol=ISSN 1006-687X DOI: 10.3724/SP.J.1145.2009.00549 嗜热子囊菌光孢变种β-葡萄糖苷酶的基因克隆、表达 及酶学性质分析* ** 陈卫红 李多川 (山东农业大学植物保护学院环境生物系 泰安 271018) 摘 要 从嗜热子囊菌光孢变种 (Thermoascus aurantiacus var. levisporus) RNA中通过RT-PCR克隆出β -葡萄糖苷 酶基因bgl Ⅰ的全长序列，cDNA序列为2 672 bp ，Genbank登录号为EU269025 ，将该片段插入巴斯德毕赤酵母Pichia pastoris 分泌型表达载体pPIC9K 中，获得重组质粒pPIC9K/bgl ，经线性化后用电穿孔法导入毕赤酵母GS115中，在醇氧 化酶AOX 1基因启动子作用下，获得高效表达β -葡萄糖苷酶的毕赤酵母工程菌株 . 经DEAE-Sepharose Fast Flow 阴离子 3 层析纯化了该重组表达蛋白. SDS测得该重组蛋白相对分子质量(M )约为120 ×10 . 经甲醇诱导，培养基中β -葡 r 萄糖苷酶的活力可达 1.2 U/mg，小规模发酵量达0.45 mg/mL. 该酶的最适反应温度为60 ℃，最适反应pH为5.0. 于70 ℃保温30 min仍保持 80%的酶活力，具有较高的热稳定性，在pH 3.0~9.0 的条件下酸碱耐受性强. 图6 表 1 参22 关键词 嗜热子囊菌光孢变种；表达；纯化；毕赤酵母；β -葡萄糖苷酶 CLC Q556.2 : Q949.325.06 Cloning, Expression and Enzymic Property Anylysis of β-glucosidase from A Thermophilic Fungus Thermoascus aurantiacus var. levisporus* CHEN Weihong LI Duochuan** (Department of Environmental Biology, College of Plant Protection, Shandong Agricultural University, Tai’an 271018, Shandong, China) Abstract β -glucosidase bgl Ⅰgene was isolated from thermophilic fungus Thermoascus aurantiacus var. levisporus RNA through RT-PCR. The length of the gene was 2 672 bp, which was registered in GenBank with accession number EU269025, and the gene was ligated with the