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分析检测中标准曲线相关问题探讨主讲人：calfstone 数据处理版面专家活动时间：2012年5月18日——2012年5月29日我们热烈欢迎calfstone老师光临数据处理版面进行讲座！ 引言：分析检测的首要任务是定性和定量，定性可以说是有和无的问题，定量是提供待测物质含量范围的一个过程，这当中包含了任何定性定量都有不确定度的含义。而普遍采用的标准曲线已然是分析检测中的常规工作，本次讲座以讲解加问答的形式探讨标准曲线使用过程中的难点和误区，结合数据处理版面关于标准曲线的问题交流，以期开拓思路和解决日常工作中的困惑，并欢迎大家提出新的问题，共同探讨共同进步。 内容提要：1、 标准曲线的本质：系列浓度待测物质与响应的关系，用以推算样品含量。2、 标准曲线的做法：3点以上，至少重复2次，浓度均匀设置3、 标准曲线的检验：拟合检验、失拟检验和斜率、截距检验4、 标准曲线使用中的问题4.1 标准曲线需要人为的增加（0,0）点吗？4.2 标准曲线需要减掉试剂空白来做吗？4.3 什么时候用Y=bX和二次曲线呢？4.4 标准曲线去查含量时是先减空白信号算样品含量还是先算出空白含量相减呢？4.5 如何做两条标准曲线的检验呢？4.6 标准系列的标准溶液体积取用中有效数字该如何写呢？4.7 标准曲线的相关系数的有效数字该如何保留呢？4.9 标准曲线查出样品是负值，如何报告结果呢？4.10 空白测出来是负值，该不该减呢？4.11 线性范围（动态范围）的最低点和最高点如何确定呢？ 1、 标准曲线的本质分析检测中的标准曲线是指一系列已知含量（浓度/量）的物质与仪器响应/信号之间的关系，数学处理就是曲线方程，图形表示就是标准曲线（图1）。标准曲线的目的是可以根据标准曲线查出待测物质的含量。当我们得到一系列已知含量的物质的响应后，就会去建立函数关系，数学上称曲线拟合，由于直线最为简单，所以常常用直线方程加以拟合，当然会用到多项式拟合等其他方式。标准曲线的核心问题要解决：1、能找到确切浓度的标准物质或标准品。2、标准系列和待测物质一定要有相同和一致的基体，因为样品基体可能会干扰仪器的响应，从这个意义上讲，样品的前处理实际就是提供标准和样品同样的基体环境，尽量祛除干扰基体。所以最好的标准系列应该是样品基体匹配的标准系列。而方法建立过程中首先要考虑的当然是基体干扰的问题，推荐用标准加入曲线和Youden曲线分别考察样品基体所带来的乘积性干扰和加和性干扰。标准加入曲线就是在样品中加入一系列标准，然后考察该标准加入曲线和标准曲线斜率的统计学差异，若有差异需考虑用标准加入法定量；而Youden曲线就是对样品做一系列稀释，然后用稀释倍数如1/10,1/5,1/2,1对仪器响应做曲线，考察该Youden曲线的截距与0的差别，若有差别则提示有加和性干扰，此时测定值要减去该截距才是真实值。只有解决了标准曲线与样品基体的匹配问题，我们的定量才可靠。内标法和替代物的使用则是为了解决仪器和前处理的影响问题。2、 标准曲线的做法按GB/T22554-2010《基于标准样品的线性校准》推荐：1、标准曲线的浓度范围应覆盖正常操作条件下的被测量范围；2、标准样品的组分尽量与被测样品组分一致；3、标准样品的浓度值应等距离的分布在被测量范围；4、标准样品的个数至少应有3个浓度；5、每个标准点至少重复2次，这个重复是指从稀释开始；如果国家标准有相应的浓度系列推荐，尽量按国家标准，如果你要偷懒，比如我要减少标准点，至少要有理论标准支撑，比如至少要3个浓度。工作中我们经常采用线性校准，因为线性方程最为简洁。3、 标准曲线的检验标准曲线的检验是实际操作中最大的难点，也是工作中误区和争议最多的话题，比如GB/T 5750.3-2006就将标准曲线的检验分为：精密度检验，截距检验和斜率检验，但并未出示具体的检验方法。首先讲讲这三个检验，标准曲线的精密度检验，实际含义就是做出来的试验点在我拟合的直线方程左右的分布情况，标准曲线是所有点以最小二乘算法（OLS）拟合出来的，这条曲线到所有点的垂直距离的和（残差）是最小的。因此这条曲线并非通过所有点而是非常接近所有点，精密度检验就是看这些试验点距离拟合的直线的距离有无异常，所以也称线性检验（拟合检验）。这时的精密度（线性检验）需用F检验，P0.05作为线性检验合格的标准。标准曲线的截距检验和斜率检验分别考察Y=a+bX中a和b与0的统计学差异，a与0有差别说明有试剂空白或系统误差，而b若与0没差别说明仪器的灵敏度根本达不到分析要求。日常工作中我们通常用相关系数来作为标准曲线好坏的标准，这点有一定道理，但并不全面。决定系数是相关系数的平方，就是我们经常在仪器