地氟醚对大鼠心肌细胞质膜钙atp酶活性的影响.pptVIP

《地氟醚对大鼠心肌细胞质膜钙ATP酶活性的影响》 目的：观察地氟醚对心肌细胞质膜Ca2+-ATPase活性的影响，探讨其心肌抑制作用的机制。方法：参照文献方法制备大鼠心肌细胞质膜，观察不同浓度（0%～11%）地氟醚在底物缓冲液不同钙离子浓度（0.4～20μmol/L）或反应温度（25℃、37℃）时，对质膜Ca2+-ATPase活性的影响。(1)取通入不同浓度地氟醚的底物缓冲液0.8ml，加入0.2ml上述质膜溶液和0.1mlCaCl2使其浓度分别为0.4、1、2、4、20μmol/L开始反应，37℃水溶10min后，加入12%三氯乙酸0.5ml中止反应，反应过程中持续在反应液表面吹入不同浓度的地氟醚；（2）取通入不同浓度地氟醚的反应底物缓冲液0.8ml，加入0.2ml质膜溶液和0.1ml CaCl2浓度为20μmol/L，37℃或25℃水浴10min后用三氯乙酸中止反应。 上清液中无机磷的含量用分光光度法于660nm处定量测定。Ca2+-ATPase的活性以每小时每mg蛋白水解ATP所释放的无机磷的μmol数表示（μmolPi·mg-1protein）。所有数据以均数±标准差表示，比较采用配对t检验。地氟醚浓度、底物缓冲液中钙离子浓度与质膜Ca2+-ATPase活性行直线相关分析。结果：临床使用浓度的地氟醚对心肌细胞Ca2+-ATPase有抑制作用，且随浓度的升高，酶的活性随之降低（r=-0.714,P0.01）。例如：底物缓冲液中钙离子浓度为0.4μmol/L时，3%、5%、7%、9%、11%的地氟醚分别使Ca2+-ATPase活性下降了21.0%、31.9%、50.4%、71.4%和88.2%，与基础值比较均有统计学意义（P0.05）。同一浓度的地氟醚对Ca2+-ATPase的抑制作用在底物缓冲液中钙离子浓度低时大于高时（r=0.497，P0.05），37℃时大于25℃时，如表6.1、图6.2、图6.3所示。 分析 原作者对地氟醚浓度、底物缓冲液中钙离子浓度与质膜Ca2+-ATPase活性进行了直线相关分析。计算出了相关系数r的大小，并对其作了假设检验，并以假设检验的结果作为依据，推断出不同浓度的地氟醚和不同钙离子浓度对Ca2+-ATPase抑制作用不同的结论。显然这种结论是站不脚的，直线相关分析仅是研究两变量之间呈直线关系的密切程度和方向，要求两变量都是随机取值，对相关系数的假设检验如果拒绝原假设，仅仅说明两变量具有较好的直线相关关系，并不能说明一个变量取不同值时，另一个变量对应值的差异具有显著性意义。 分析 另外，从图6.2可以看出，横、纵轴上分别为底物缓冲液中钙离子浓度的倒数和质膜上Ca2+-ATPase酶活性的倒数。它们之间具有较好的线性关系，还原为相应的变量值，则直线方程为1/y=a+b/x，所以y=x/(ax+b)，从此方程可以看出，变量y与x之间并不呈线性关系，而可能呈某种曲线关系。故不适合对两个变量直接作直线相关分析。从图6.3中可以看出，两变量之间并不呈直线关系，而是呈倒“S”曲线关系，故也不适合作直线相关分析。 释疑 正确的做法是应根据分析目的合理选择统计分析方法，如果关心的是不同地氟醚浓度和不同钙离子浓度所对应的Ca2+-ATPase活性是否存在显著性的差异，根据此资料的性质，可以选用两因素析因设计资料所对应的方差分析进行处理。如果想了解不同地氟醚浓度和不同钙离子浓度与Ca2+-ATPase活性之间的关系，可以先绘制散布图，然后根据散布图的特征，决定是否进行直线回归分析或曲线拟合，如果散布图呈现明显的倒“S”形，此时一般宜进行logistic曲线拟合，如果呈指数、对数曲线变化趋势，宜对其中的变量进行相应的变量变换，使变换后的散布图呈直线变化趋势，然后求出直线回归方程，再还原为曲线回归方程。 释疑 切忌不分情况，一律进行直线相关回归分析，这样往往掩盖事物本质的联系，而得出错误的结论来。对有重复试验数据的资料，不宜计算重复试验数据的平均值后再作回归分析，而应该用原始数据进行回归分析，这是因为回归方程是否有统计学意义与自变量各取值条件下的因变量的试验数据的变异程度有关，由各重复试验数据的均数作回归计算掩盖了真实的变异性，另外还要做失拟检验，以表明直线回归方程是否合适以及有无其他未加控制的影响因素的干扰。当然，若希望同时运用地氟醚浓度和钙离子浓度来预测Ca2+-ATPase活性，最好选用二元线性回归分析。 * 9.1±0.8 12.5±2.2 13.4±1.6 13.2±1.9 13.9±3.4 13.3±2.7 20 7.6±0.5 10.2±1.5 12.5±1.7 13.2±1.6 13.7±3.2 13.5±1.9 4 4.9±0.4 9.4±0.5 10.2±2.4 12.8±3.