AG490对高浓度瘦素下人脂肪细胞代谢的作用.pdfVIP

摘要 摘要 目的： 观察AG490对人脂肪细胞增殖以及对高浓度瘦素作用下人脂肪细胞脂质 代谢的影响，了解AG490对脂肪细胞直接作用存在与否；探讨JAK／STAT通路在 瘦素抵抗形成中的作用。 方法：(1)无菌取人腹部皮下脂肪，采用胶原酶消化法分离出前脂肪细胞进行培 养，待细胞融合后诱导分化为脂肪细胞，光镜下观察细胞的形态学变化并经油 红O对细胞内脂质染色进行细胞鉴定后培养于培养液A中，置入370C、5％C02条 件下培养达到试验要求后随机分组进行试验。(2)AG490对入脂肪细胞增殖的影 响：A、不同剂量AG490对人脂肪细胞生存的影响：将人脂肪细胞调制成3x104／ml 3个复孔，培养24h，用MTT法检测细胞增殖情况，并用培养液A作对照；B、 A6490作用不同时间对人脂肪细胞增殖的影响：方法同前，AG490的剂量同上， 作用下人脂肪细胞脂质代谢的影响：脂肪细胞按5x104／Iill的浓度接种于24孔培 养板，置370c、5％C02条件下培养16h，至细胞贴壁后分组：l、高浓度瘦素对 照组；2、AG490干预组：A、AG4905umol／L；B、AG490lOumol／L；C、AG49015umol／L， D、AG490 分别收集各组培养液检测游离脂肪酸和甘油的浓度。(4)对各组参数进行统计学 分析。 结果： (1)成功分离并培养人前脂肪细胞，观察了它们的增殖以及诱导分化过 程：细胞增殖期内的4一lOd为对数增长期；分化培养的第4d细胞内可见脂质小 滴并逐渐增多，21d左右大部分分化为成熟脂肪细胞；成熟脂肪细胞传代时间为 度AG490组细胞增殖与对照组相比无显著差异。(3)游离脂肪酸铜抽提法测定实 20umol／LAG490干扰下，高浓度瘦素环境脂肪细胞培养液游离脂肪酸变化：①作 H 摘要 组细胞培养液中游离脂肪酸与对照组相比，差异有统计学意义(PO．05)。 采用GPOTrinder酶学反应，通过比色测定实验组培养液中甘油浓度；观察分 0umol／L，1 别在5umol／L，1 脂肪细胞培养液甘油变化：②作用24h时，较对照组分别增加了46．9％、56．4％、 79．9％、80．6％；作用48h时，测定各组细胞培养液甘油含量较对照组分别增加 较对照组分别增加了15．1％、23．8％、28．5％、31．4％。说明在不用时间点上，各 浓度AG490组细胞培养液中甘油与对照组相比，差异也具有统计学意义 (PO．05)。③AG49015umol／L浓度组与AG490 20umol／L浓度组两组间游离脂 肪酸和甘油相比，不存在统计学差异(P0．05)。 结论： (1)成功地提取和培养了人腹部皮下前脂肪细胞以及顺利诱导分化为脂 肪细胞，为研究各种激素和药物等对脂肪细胞的作用提供了实验细胞模型。(2) 实验结果显示AG490对正常脂肪细胞增殖无明显影响，推钡tJAG490对脂肪细胞代 谢无直接作用。(3)AG490可以干扰瘦素对脂肪细胞脂质代谢影响作用，并具有 时间和剂量依赖性。 关键词：AG490；JAK／STATs通路；瘦素；脂肪细胞； 增殖；代谢。 III ABSTRACT observetheeffectsof transducerand Janus activatorof Objective：To kinase／signal AG490onthe of transcriptionpathway(JAK／STATpathway)inhibitorproliferation humanfatcellsin tounderstandtheroleofAG490humanfatcells vit