AG490阻断STAT3信号通路对C6胶质瘤细胞的抑制作用的实验探究.pdfVIP

目 录 一、摘要 中文论著摘要…………………………………………．．1 英文论著摘要…………………………………………．．4 二、英文缩略语……………………………………………．．7 三、论文 —，，．一t．． 刖舌…………………………………………………．．8 材料与方法……………………………………………．10 实验结果………………………………………………19 讨论…………………………………………………．26 结论…………………………………………………．28 四、本研究创新性的自我评价…………………………………．29 五、参考文献………………………………………………30 六、综述…………………………………………………．．32 七、附录 在学期间科研成绩………………………………………．43 致谢…………………………………………………．44 个人简介………………………………………………45 ·中文论著摘要· AG490阻断STAT3信号通路对C6胶质 瘤细胞的抑制作用的实验研究 刖 舌 神经胶质瘤是中枢神经系统最常见的原发性恶性肿瘤，其浸润广泛，手术极 难全切，辅以放化疗效果也不佳，所以寻找胶质瘤治疗的新靶点成为目前研究的 热点，这些研究主要集中在肿瘤相关基因的克隆和功能分析、细胞信号的转导及 activators transducersand 细胞周期调控等领域。信号转导及转录活化因子3(signal oftranscription，STAT3)是目前研究的一个热点，其过度激活将导致细胞的异常 增殖和凋亡障碍，直接参与细胞的恶性转化。STAT3介导各种细胞因子和生长因 子所引起的广泛的细胞反应，作用涉及细胞的增殖、分化和免疫调节等许多方面， 研究在多种人类恶性肿瘤中发现了STAT3信号通路异常激活的现象，STAT3的异 常激活能够通过生长因子信号系统与凋亡相关因子、促血管新生因子等相互作用 而导致肿瘤生成并促进肿瘤的发展。 材料与方法 本实验采用体外培养大鼠C6胶质瘤细胞株，并构建不同浓度(25／aM，50I-tM， (24小时、48小时和72小时)的模型。分别用免疫细胞化学染色方法以及相差 别细胞总蛋白，通过蛋白定量检测蛋白浓度，WesternBlot半定量的方法检测 质瘤细胞株侵袭性特征的影响；在各组AG490阻断S耵Ⅱ3信号通路的细胞模型 亡检测试剂盒及流式细胞仪检测肿瘤细胞的DNA细胞周期和细胞凋亡检测。 结 果 pSTAT3都有表达，其中STAT3蛋白在肿瘤细胞的胞浆和胞核中均有表达，而 p．STAT3蛋白则在胞核中强烈表达，提示STAT3磷酸化激活后转入细胞核内实施 转录。 2．各浓度AG490阻断STAT3信号通路后的C6细胞与对照在条件完全相同的 情况下培养72小时。提取细胞总蛋白，通过蛋白定量检测蛋白浓度，WeSternB10t 结果显示：STAT3蛋白的 半定量的方法检测STAT3和p-STAT3的表达情况。 高而逐步降低。所以，AG490能够阻断STAT3信号通路，其机制是通过抑制STAT3 路阻断的效果呈现浓度依赖的特点，并受到肿瘤细胞中STAT3和p-STAT3基础表 达量的影响。 3．阻断STAT3信号通路可明显抑制胶质瘤细胞C6的细胞增殖，并使肿瘤细 胞的存活率降低。单因素方差分析的结果显示AG490对胶质瘤细胞增殖和存活率 的抑制作用具有浓度效应。作用浓度影响因素的P0．05，具有统计学意义。因而， AG490能够通过阻断STAT3信号通路而抑制胶质瘤细胞株增殖并使肿瘤细胞存 活率降低。 Matrix及湿化小室。2xlC个C6细胞同 酸酯微孔膜孔径8“M。使用前铺Matrigd 含50州的AG490培养液