AGR2基因对人气道上皮细胞粘蛋白MUC5AC的作用.pdfVIP

目 录 1 AGR2 基因对人气道上皮细胞粘蛋白MUC5AC 表达的影响1 1.1 中文摘要………………………………………………………1 1.2 英文摘要………………………………………………………4 1.3 前言……………………………………………………………8 1.4 材料与方法……………………………………………………12 1.5 结果……………………………………………………………25 1.6 讨论……………………………………………………………3 1 1.7 结论……………………………………………………………38 1.8 参考文献………………………………………………………39 1.9 英汉缩略词对照表……………………………………………46 2 致谢…………………………………………………………… 3 气道粘液中粘蛋白MUC5AC 与气道粘液高分泌的研究进展 （综述）………………………………………………………47 AGR2 基因对人气道上皮细胞粘蛋白MUC5AC 表达的影响 中文摘要 研究背景 气道粘液高分泌（airway mucushypersecretion）是慢性 气道炎症性疾病的重要病理生理特征之一，也是目前呼吸系统疾病亟 待解决的主要问题之一。由于目前粘液高分泌相关性疾病的普遍性和 危重性，人们逐渐开始关注MUC，即粘蛋白。目前，已发现了21 种 粘蛋白，其中至少有12 种在气道中表达。在病理状态下，气道粘蛋 白的改变主要表现为由杯状细胞分泌的MUC5AC 增加。许多粘液高分 泌疾病，如支气管哮喘、慢性阻塞性肺疾病（COPD）、支气管扩张、 囊性纤维化（CF）等疾病的病理生理改变与MUC5AC 的表达升高密切 相关，所以研究粘蛋白MUC5AC 表达的调控机制尤为重要。 AGR2(human anterior gradient-2，HAG-2 或Gob-4)，是蛋白质 二硫键异构酶家族（PDIs）的成员之一，是一个在人组织中广泛表达 但功能尚不清楚的小分子分泌型蛋白。MUC2 是肠道粘液的主要成分， 动物实验研究发现AGR2 与肠道粘液合成密切相关，其对肠道粘液产 生是必不可少的。MUC5AC 是气道粘液中最主要的组成部分，我们设 想AGR2 与气道粘液分泌也存在密切关系，所以我们采用NIC-H292 细胞，给予CMV-Sport6-AGR2 质粒转染细胞，检测气道粘蛋白MUC5AC mRNA 及蛋白的表达情况，探讨AGR2 对人气道上皮MUC5ACmRNA 和 MUC5AC 蛋白表达的影响。 研究目的 观察CMV-Sport6-AGR2 质粒转染人气道粘液上皮NCI-H292 细胞后AGR2mRNA 和 MUC5ACmRNA 的表达情况，同时检测粘蛋白MUC5AC 的表达，探讨AGR2 对人气道上皮MUC5ACmRNA 和MUC5AC 蛋白表达的 影响。 研究方法 体外培养人气道粘液上皮癌细胞系NCI-H292 细胞，予以不 同浓度的CMV-Sport6-AGR2 质粒转染NCI-H292 细胞24h 后，采用免 疫细胞化学方法检测不同浓度的CMV-Sport6-AGR2 质粒转染情况，即 AGR2 蛋白表达情况。选择最佳浓度的CMV-Sport6-AGR2 质粒转染 NCI-H292 细胞，设为转染组，没有用CMV-Sport6-AGR2 质粒转染的 NCI-H292 细胞设为对照组。采用逆转录-聚合酶链式反应（PT-PCR） 技术检测两组细胞AGR2 mRNA 和MUC5AC mRNA 的表达情况；免疫细胞 化学SP 染色法观察两组细胞MUC5AC 蛋白的表达情况。 研究结果 1.CMV-Sport6-AGR2 质粒转染NCI-H292 细胞的最佳浓度为1.33 μ g/ml，设此浓度的CMV-Sport6-AGR2 质粒转染NCI-H292 细胞为转染 组。 2.CMV-Sport6-AGR2 质粒转染NCI-H292 细胞后AGR2mRNA 和 MUC5ACmRNA 表达水平的变化： 2.1 RT-PCR 结果显示，CMV-Sport6-AGR2 质粒转染NCI-H292 细胞后 AGR2mRNA 表达阳性（0.61±0.05），而对照组未出现AGR2 mRNA 的表 达，差异具有统计学意义（P＜0．01）。 2.2 RT-PCR 结果显示，CMV-Spo