AQP1基因敲除鼠滋养细胞水通透性的变化探究.pdfVIP

广州医学院硕士论文 AQP1 基因敲除鼠滋养细胞水通透性的变化研究 AQP1 基因敲除鼠滋养细胞水通透性的变化研究 硕士研究生：沙晓燕 导 师：刘慧姝 教授 中文摘要 母胎液体平衡对整个妊娠过程至关重要，正常的羊水量也是胎儿活动、生长 和发育所必需的。胎盘作为机体妊娠期间的临时器官，在母胎液体交换及营养物 质代谢等过程中发挥重要作用。 水通道蛋白（Aquaporins ，AQPs ）是一类对水具有高度选择性的糖蛋白,能 够根据渗透压或流体静脉压介导水快速被动地跨生物膜转运。迄今为止, 已发现 13 种水通道蛋白(AQP 0～12)存在于哺乳动物中，其表达、分布及相关功能研究 也已被陆续报道。众多研究已证实多种水通道蛋白基因在人、鼠及羊等哺乳动物 的胎盘、胎膜组织中分布表达，提示AQPs 可能在妊娠生理，尤其是母胎液体平 衡中发挥关键作用。 课题组前期研究已证实 AQP1 基因敲除孕鼠的相关妊娠表型发生变化，提供 了AQP1 在妊娠生理及羊水平衡中的直接证据。本课题利用 AQP1 敲除小鼠模型 建立了孕鼠胎盘滋养细胞体外培养系统，通过测试 AQP1 基因敲除型滋养细胞与 野生型滋养细胞的水通透性差异，从功能方面提供了 AQP1 在母胎液体平衡中发 挥作用的直接证据。另外，本课题对 AQP1 基因敲除型滋养细胞的迁移能力做了 初步研究，为 AQP1 基因在产科相关疾病及妊娠滋养细胞疾病中的作用提供了理 论基础。 1 广州医学院硕士论文 AQP1 基因敲除鼠滋养细胞水通透性的变化研究 第一部分 AQP1 基因敲除鼠滋养细胞水通透性的变化研究 第一章 野生型及 AQP1 基因敲除型胎盘滋养细胞的培养及鉴定 【研究目的】 培养符合实验要求的野生型（wild type ，AQP1+/+ ）及 AQP1 基因敲除型 （AQP1-knockout, AQP1-/- ）胎盘滋养细胞。 【方法】 成年健康野生型CD1小鼠（AQP1+/+ ）及AQP1基因敲除小鼠（AQP1+/+ ）分别按 雌雄小鼠等量合笼交配，第二日检出阴道栓者记为妊娠第1天（1 gestational day, 1GD）。选取12GD孕鼠的胎盘组织，应用组织块培养法对AQP1+/+ 及AQP1-/-胎 盘组织进行滋养细胞原代培养；胰蛋白酶消化法进行传代培养；应用滋养细胞内 的特异细胞骨架蛋白细胞角蛋白7 （CK-7 ）进行免疫化学染色细胞鉴定。 【结果】 组织块培养第 2 日细胞便开始从组织块边缘向周围生长，数日后细胞呈片状铺展 生长；15 日即可进行细胞传代；两组滋养细胞在肉眼可见的大小、形态及生长 情况未见明显区别。细胞角蛋白 7 （CK-7 ）染色示细胞纯度达95% 以上。 【结论】 成功建立了野生型和AQP1基因敲除型滋养细胞体外培养体系, 以备本研究后续 实验之用。 【关键词】水通道蛋白 1，基因敲除鼠，滋养细胞，细胞培养 第二章 野生型及 AQP1 基因敲除型滋养细胞水通透性测定 【研究目的】 课题组前期研究显示 AQP1 基因敲除小鼠母胎液体平衡受损，本研究通过检测 AQP1 基因敲除型滋养细胞水通透性的变化，直接从功能上探讨 AQP1 在母胎液 体平衡中的作用。 【方法】 2 广州医学院硕士论文 AQP1 基因敲除鼠滋养细胞水通透性的变化研究 1. 应用免疫荧光方法证实AQP1基因在滋养细胞的表达。 2. 应用钙黄绿素荧光淬灭方法对成功培养的AQP1基