AQP4抗体对体外培养大鼠皮层神经细胞的毒性影响.pdfVIP

中文摘要 AQP4抗体对体外培养大鼠皮层神经细胞的毒性作用 摘 要 视神经和脊髓的中枢神经系统炎性脱髓鞘性疾病。尽管NMO患者血清中 特异性自身抗体即AQP4抗体的发现修改了NMO的诊断标准，且扩展了 研究发现小鼠脑内注射AQP4抗体和人补体可产生类似人NMO的病理改 变特征，包括炎性细胞的浸润、神经纤维脱髓鞘、水通道蛋白．4(AQP4) 及神经胶质原纤维酸性蛋白(GFAP)的表达减少、血管周围免疫球蛋白 和补体沉积等。体外研究也表明AQP4抗体阳性的NMO患者血清以补体 依赖形式导致原代培养星形胶质细胞坏死，但对大鼠脑皮层混合培养的神 经细胞中小胶质细胞和神经元的作用尚未见报道。本研究使用体外培养的 胎鼠皮层神经细胞，分别加入AQP4抗体阳性或阴性的NM0患者血清后， 观察不同时间点星形胶质细胞、神经元以及小胶质细胞的形态学和数量的 变化，以及细胞因子白介素．6浓度的变化，探讨AOP4抗体对皮层神经 细胞的毒性作用及其机制。 6—1 方法：常规方法提取Wistar大鼠胎鼠(孕l9天)的大脑i皮层。将 皮层神经细胞接种于直径为35mm培养皿中，培养液为含20％J：J台牛血清 加入正常人血清。2．AQP4抗体阴性对照组：加入等量AQP4抗体刚性患 者血清。3．AQP4抗体阳性组：加入等量AQP4抗体阳性患者血清。培养 BR 0个不同的视野，使用NIS—Elements3．0软件采 TE2000)下随机选择l 样，应用Image 的细胞数，并通过计数Hochest33258标记的细胞核数来明确细胞总数， 然后计算卅同神经细胞所占的比例。结果采用SPSSl3．0统计软件处理， 所有计量资料采用页±S表示，多组问单IXJ素方差分析。P0．05认为差 异有统计学意义。 中文摘要 结果： 1．AQP4抗体对原代培养的大鼠皮层神经元及星形胶质细胞形态及 数量的影响：结果显示，正常对照组在培养2h、4h、6h后，星形胶质细 胞及神经元形态和数量无明显差别，而抗体阳性组和阴性对照组在血清作 用2h后即发现星形胶质细胞和神经元形态学的变化，表现为星形胶质细 胞胞体肿胀、神经元突起断裂。AQP4抗体阳性组2h时星形胶质细胞和 5．27％和35．49±8．43％(和对照组比较．P均O．01)；6h时减少更加明显， 分别为1 学分析也表明星形胶质细胞和神经元数目2h、4h和6h比较差异有显著意 星形胶质细胞数目2h、4h和6h比较差异有最著意义(P0．01)。 2．AQP4抗体对原代培养的大鼠皮层小胶质细胞形态及数量的影响： 体增大，边缘不规则，突触变短，随着时间延长，形态学变化更明显。 8．55±9．78％幂N AQP4抗体阳性和阴性组在2h时小胶质细胞数目分别为l l8．39±5．03％，和对照组的1 7％和 和6h时AOP4抗体阳性组小胶质细胞数目分别增加到27．35±13．1 40．37±1 3．28％，抗体阴性组增加到24．70±7．27％31332．60±10．77％，均明 显高于对照组(P均O．01)。但统计学分析显示两组不同时间点时细胞 数目比较差异无显著意义(尸均0．05)。 3．AQP4抗体对原代培养的大鼠皮层神经细胞分泌IL．6的影响：使 用ELISA方法检测不同组别不同时间点细胞培养上清液IL．6水平，发现 4h和6h时分别达到28．56±O．15和30．78±0．08，但仍明鼹低于对照组 中文摘要 于对照组水平(P0．01)，6h时有所下降，为34．01±O．1O，但仍高于 对照组水平(P0．01)。 结论：本研究表明AQP4抗体阳性患者血清可以导致体外大鼠脑皮 层混合细胞培养中星形胶质细胞死亡、小胶质细胞激活和神经