ASIC1a对黑质纹状体多巴胺递质释放的调节和其分子机制.pdfVIP

ASIC1a 对黑质纹状体多巴胺递质释放的调节及其分子机制 中文摘要 I 中文摘要 ASIC1a 对黑质纹状体多巴胺递质释放的调节及其分子机制 II ASIC1a 对黑质纹状体多巴胺递质释放的调节及其分子机制 中文摘要 ASIC1a 对黑质纹状体多巴胺递质释放的调节及其分子机制 中文摘要 第一部分 酸敏感离子通道1a 在MES 23.5 细胞以及斑马鱼体内的表 达和功能 目的：酸敏感离子通道（Acid sensing ion channels ，ASICs ） 是一类胞外酸化激 活的非电压门控的阳离子通道。本实验从基因和蛋白水平检测MES 23.5 细胞和斑马 鱼体内ASIC1a 的表达，并研究该通道的功能特性，为初步探讨ASIC1a 在帕金森病 (Parkinson′s disease, PD)发病中的作用提供动物和细胞模型。 方法：体外培养MES 23.5 细胞，RT-PCR 的方法在 mRNA 水平检测MES 23.5 细胞ASIC1a 的表达；Western blotting 方法在蛋白水平检测ASIC1a 的表达；细胞免 疫荧光标记的方法确定 ASIC1a 在 MES 23.5 细胞上的分布；全细胞膜片钳检测 ASIC1a 电流特性；钙离子成像的方法检测MES 23.5 细胞上ASIC1a 通道的离子通透 性。免疫荧光标记和整体原位杂交方法观察ASIC1a 通道在斑马鱼体内的表达分布； 全细胞膜片钳检测ASIC1 电流特性；行为学实验检测ASIC1 对斑马鱼视觉功能的影 响。 结果：（1）从基因和蛋白水平证实 ASIC1a 在MES 23.5 细胞上有表达。ASIC1a 主要分布在胞膜和胞浆，与酪氨酸羟化酶（Tyrosine hydroxylase，TH ）有共表达。（2 ） MES 23.5 细胞胞外酸化可诱发出ASICs 电流，该电流可被阿米洛利（Amiloride ）和 ASIC1a 特异性抑制剂狼蛛毒素（PcTx1 ）阻断。（3 ）斑马鱼的脑部和眼球存在ASIC1 基因和蛋白的表达，但是未能观察到与TH 的共定位。（4 ）斑马鱼视网膜视神经节细 胞上记录到ASICs 电流。（5 ）阻滞ASIC1 会造成斑马鱼视觉功能障碍。 结论：（1）MES 23.5 细胞上存在功能性 ASIC1a 的表达。（2 ）斑马鱼的视网膜 上存在 ASIC1 的表达，主要分布在视神经节细胞层、内板状层、内核层、外板状层 以及感光细胞层。阻滞ASIC1 的活性能够降低斑马鱼对光的敏感性，提示ASIC1 可 能参与斑马鱼视觉功能的调控。本实验为探讨ASIC1a 在PD 发病中的作用提供了实 验基础以及简单易行的模型。 III 中文摘要 ASIC1a 对黑质纹状体多巴胺递质释放的调节及其分子机制 关键词： 酸敏感离子通道； MES 23.5 细胞；斑马鱼；视网膜 IV ASIC1a 对黑质纹状体多巴胺递质释放的调节及其分子机制 中文摘要 第二部分 酸敏感离子通道 1a 对胞外酸化诱导的多巴胺递质释放的 调控及其分子机制 目的：研究ASIC1a 对多巴胺递质释放的调节，探讨ASIC1a 在PD 发病中的作 用机制，并观察阻滞ASIC1a 能否减轻PD