ATM基因及肝癌细胞辐射损伤修复的关系研究.pdfVIP

摘要 研究背景 原发性肝细胞癌(Hepatocellularcarcinoma)是我国常见的恶性肿瘤之一， 其年发病率约20／10万，死亡率高居癌症死亡率的第二位。目前原发性肝癌的治 疗方式首选外科于术，但限于诊断水平、症状出现较晚等诸多因素，使得于术切 除率低(20％)。现由于放射治疗设备和技术的发展，三维适形放射治疗已成为肝 癌非于术治疗的主要方法之一ll】。然而，由于肝癌细胞的相对辐射抗拒性，使得 肝癌的根治剂量明显高于肝脏的耐受剂量，尤其中晚期肝癌患者多数伴有肝病基 础，又限制了放疗剂量的提高，导致肝癌放疗效果彳i佳【2’3、41。如何提高肝癌的 放射敏感性成为肝癌放射治疗的一个难点和方向。 radiation，IR)通过直接作用或间接作用导致 放疗主要是电离辐射(ionizing 细胞DNA的损伤，从而引起细胞死亡【l】。放疗效果不佳，主要有两方面的原因： l、细胞本身原因或其肿瘤细胞微环境保护从而导致细胞对射线不敏感；2、电 离辐射后损伤细胞的修复；后者是主要因素。细胞DNA的损伤主要表现为单链 断裂(SSB)和双链断裂(DSB)，如未及时修复会导致细胞死亡，丧失其再增 殖能力和突变等。现研究认为DNA双链断裂(DSB)的修复是细胞辐射抗拒的 主要原因之一。较为公认的修复机制主要有两种：同源重组修复(HRR)和非 中文摘要 同源末端修复(NHEJ)。在哺乳动物中，以NHEJ为主。最新研究表明是DSB 修复能力而非DSB数目影响细胞的存活【5。7J。 当IR引起细胞DNA断裂时，其第一步就是DNA断裂检测点的出现：复杂 Dunl磷酸化，Rad9在受损的所有细胞周期中是一个检测反应的介质，也作为 1 Rad50Xrs2／NBSl)检测到的，同 开始被DNA末端有MR(X)N复合物(Mrel 时这个复合物还引导修复及端粒的修复【8】。 第二步就是机体对DNA断裂的反应：损伤信号发出后，有修复因子、周期 调控因子、转录因子的聚集。H2AX的磷酸化(r-H2AX)也是最早出现的现象 起到扩大损伤信号的作用。所以检测点产生DNA断裂的反应，而且能调控修复， 增强修复的有效性，能在细胞周期阻滞或促进断裂自身修复中起着作用【111。 修复蛋白被募集至DNA断端时，就开始启动修复程序。两种主要修复方式 具体如下：1、非同源末端连接(NHEJ)因不考虑同源序列而成为首选的修复方 式，它以基本碱基配对的方式直接把末端先连起来。因没有任何修饰，所以难 免会有DNA少量插入或消失，对于非同源或不配对的序列来说，这不影响其修 生成时，MRX及Ku快速的把末端连接起来并防止其降解，在其稳定过程中同时 刺激连接酶起作用。MRX是NHEJ、HR共有的唯一的蛋白复合物【l引。MRX由 助于促进碱基配对及NHEJ反应的连接【13，¨J，Mrell劈开发夹结构行使35’核 阻滞中其作用陋插】。MRX本质作用是圈合DSB及添补连接酶复合物，能起到核 酶的作用。在动物中，Ku是很必须的，属于DNA．PK复合物中的一部分，其催 硕士学位论文 化亚基DNA．PKcs是连接断端的因子，所以这可能是在动物中不用MRX的原因。 在NHEJ中的作用是保护DSB末端(NHEJ中)及预防5‘末端切除。连接酶有： Li94／Ligase 对及不亲和的DNA断裂端，这种灵活性在修复任何DSB中有很大的潜在的优势。 2、同源重组修复(HR)是对DSB分子的改变，如序列相同有高度忠实性，否则 1 and nucleases RAD54，RAD55，RAD57，RAD59，RDH54，MRElXRS2，所需酶有：DNA (Exol，Radl—Radl0)，hel 1 to HR polymerases(Pol32)andigasesmayrequiredcomplete specific