ATF6在家性肌萎缩侧索硬化模型hSOD1G93A转基因小鼠脊髓中的表达变化.pdfVIP

中文摘要… 英文摘要… 研究论文 前言… 材料与 结果… 附图… 附表… 讨论…诃论… 结论…，WyLJ… 参考文 综述选择 致谢……… 个人简历……………………………………………………………………40 中文摘要 中的表达变化 摘 要 Lateral 目的：肌萎缩侧索硬化(Am、旧trophic 渐进展的致命性的神经系统退行性疾病。其病理特征表现为脊髓、运动皮 层及脑干运动神经元丢失。临床表现为肌肉的萎缩无力、瘫痪，逐渐丧失 劳动能力，呼吸肌麻痹，患者通常在发病3．5年内死亡。目前ALS确切 的病理机制仍然不清，该病90％～95％的患者没有明显的遗传因素，即散 的突变，表达人突变SODl基因的转基因小鼠I临床及病理表现与人ALS 相似。。 多个研究证实家族性ALS中存在SODl基因突变，突变位点几乎跨 越整个SODl分子。多数为错义突变，引起表达蛋白中某个氨基酸的替换； 少数为非错义突变…早期终止突变，导致翻译后蛋白分子的一段序列缺 失。错义突变中以外显子中密码子第4位丙氨酸(A1a)突变为缬氨酸(Val)， 能机制是mSODl酶活性降低，导致自由基清除障碍，从而继发氧化损伤 运动神经元(motor 转基因小鼠ALS的症状，甚至使症状恶化，同时敲除SODl基因的小鼠 发病机制及临床前药物研究的动物模型。． 最近ALS病理机制之一内质网应激(ERS)逐渐受到关注，且已发 现ALS的脊髓前角、大脑皮层及脑干运动神经元选择性丢失大多数是由 下受到刺激后，经过多种信号传递导致细胞产生一系列形态和生化方面的 中文摘要 Korr第一次提出凋亡概念 改变而引起细胞自杀的过程。自1972年John 后，经三十几年的研究目前已知有三条主要的信号转导通路来调控细胞凋 亡：(1)线粒体通路；(2)死亡受体通路；(3)内质网通路。 当内质网内未折叠蛋白负荷严重超过内质网折叠能力时，就将导致内 质网腔内的未折叠蛋白聚集，从而导致内质网应激，其表现为未折叠蛋白 反应(unf01ded UPR)、内质网相关降解(E凡缸I)和细 poroteinresponse ERl【inase)，ATF6 受蛋白所介导的，三个感受蛋白分别是PEIⅨ(PKR．1ike faCtor 1)， (aCtiVatingtralIlscription6)和mE—l(inosit01一requiringenzyme IRE．1的分离，进而激活PI也K、ATF6和II通．1三条信号通路。 因子结构域和转录激活区域，其在非内质网应激状态下，其内质网腔部分 形式，转运至细胞核内，活化后的御陌6可增加一系列目的基因的表达， 也增加ⅫPl的转录，并激活ERSE，最终引起运动神经元凋亡。 最近研究表明在家族性肌萎缩侧索硬化动物模型hSODlG93A小鼠的 脊髓中存在内质网应激和内质网应激引起的细胞凋亡。本文将初步研究 进而探究内质网应激在ALS发病机制中的作用。 方法：第一部分：hSODlG93A转基因小鼠及其同窝对照组小鼠的获得： 的小鼠做为本实验的实验组，鉴定阴性的小鼠做为对照组。第二部分：(1) 实验分组 于各时间点用4％的水合氯醛腹腔注射麻醉小鼠，快速暴露心脏，经4％ 2 中文摘要 多聚甲醛灌注固定心脏后，取出腰段脊髓，浸泡在4％多聚甲醛48小时后， 震动切片机连续切片，每片厚20“m，冰冻切片机连续切片，每片厚30岫。 PBS连续漂洗