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ATP受体P2X，激活引起人眼小梁细胞死亡和细胞容量改变的实验研究 中文摘要 ATP受体P2X7激活引起人眼小梁网细胞 死亡和细胞容量改变的实验研究 专 业：眼科学 学位申请人： 祝芸芸 导 师： 张秀兰教授 中文摘要 青光眼是一类以眼压病理性升高为主要特征的致盲性眼病，原发性开角型青 光眼(primaryopenangleglaucoma，POAG)是其中最常见的类型之一，发病机 制至今尚未明了。异常升高的眼内压是POAG发生和进展的最主要的危险因素。 作为房水外流通路的主要部位，小梁网在眼内压的调控过程中起着重要作用。该 流出通道不畅将直接引起眼压升高。然而，房水流出阻力产生的原因，至今尚未 完全清楚。 嘌呤信号转导在小梁网房水流出的调控方面有一定的作用。已经证明，小梁 网细胞上有嘌呤家族的腺苷受体Al、A2、A3【卜5】和三磷酸腺苷(ATP)受体P2Yl、 开放眼房水中的非色素睫状体上皮细胞的Cl‘通道，促进房水分泌【l】，而A3受体拮 抗剂可以增加房水排出，降低眼内压【8，91；腺苷受体Al被ATP激活后可增加小梁 网细胞分泌基质基金蛋白酶．2(MMP．2)【2】；而P2Y2受体则与小梁网细胞容量变 化有关【7】等。 P2X7受体属嘌呤家族的P2X亚家族成员，是近年来发现的、一种有其独特特 道，可引起一系列相应的生物学效应，如Ca2+内流、细胞凋亡【13-16】及细胞容量改 变【7，17棚1等。另外，它还与多种细胞因子联系紧密【12,20]。 ATP受体P2X，激活引起人眼小梁细胞死亡和细胞容量改变的实验研究 中文摘要 在本研究中，我们分别培养了正常人眼和POAG病人小梁网细胞，并发现两 者均有P2X7受体的表达，且POAG病人组小梁网细胞P2X7受体的表达水平高于正 常人组。P2X7受体激动剂ATP可引起体外培养的两种细胞死亡和细胞容量改变， 随着ATP浓度增加，死亡细胞数目增加，平均细胞容量增大；且POAG病人组比 正常人眼组小梁网细胞更早发生凋亡高峰。在此基础上，我们推澳,IP2X7受体可能 对房水流出调节机制有一定影响。本课题立题旨在探讨嘌呤信号转导在青光眼发 病机制中的作用，为青光眼发病机制及防治提供新的思路。 本课题的研究主要分为以下两个部分： 第一部分 正常人和青光眼病人小梁网细胞上P2X7受体的表达 一． 研究目的 P2X7受体的表达及其表达差异。 二． 研究方法 1．材料来源：正常人眼小梁网组织来源于角膜移植后剩余的正常人新鲜眼球， 高眼压青光眼小梁组织来源于本中心青光眼病区POAG患者术中收集； 2．方法：将角膜移植后及青光眼手术后收集的小梁组织按组织块培养法进行体 外细胞培养，其中有细胞生长的统一传至第3代进行鉴定。成功培养的小梁网细 胞取第4、5、6t-七进行试验。利用Real．timePCR检测两种小梁网细胞上P2X7受体 P2X7受体蛋白的表达差异。 三． 结果 体外培养两种小梁网细胞均成功，表现为第3代细胞进行形态学、免疫学鉴 定均满足小梁网细胞的特征。分别取第4、5、6代的细胞进行Real．timePCR、免 lI AlP受体P2X，激活引起人眼小梁细胞死亡和细胞容量改变的实验研究 中文摘要 白表达，且表达有差异：GTMC上P2X7受体的表达水平高于NTMC。统计学结果 显示此差异有统计学意义。 第二部分 ATP受体P2X7激活引起人眼小梁网细胞死亡和容量改变 一． 研究目的 检测ATP受体P2X7对小梁网细胞死亡和细胞容量变化的影响，初步探讨 P2X7受体在青光眼发病机制中的作用，为青光眼发病机制及防治提供新的思路。 二．方法与材料 end 1．用TUNEL(terminaltransferase-mediateddUTPnick deoxynucleotidyl 染色法检测死亡细胞形态变化； 2．用AnneviXV／PI双染法结合流式细胞仪检测P2X7受体激动剂ATP对小梁 网细胞死亡及细胞容量的影响