牙鲆石鲽和川鲽的线粒体16srrna基因片段的序列比较研究.pdfVIP

维普资讯 第 3l卷 第 5期 青 岛 海 洋 大 学 学 报 2∞ 】年 9月 JOURNAl OFOCEAN UNIVERSITYOFQINGDAO Sept ．2001 牙鲆 、石鲽和川鲽 的线粒体 16SrRNA 基 因片段 的序列 比较研究 孔晚瑜 刮亚军 喻子丰 庄志猛。武云飞 L1教育部海水养殖研究重点实验室，青岛海洋大学水产学院 ．青岛．g566C3 2水产科学院黄海水产研究所 青岛，25667n 摘 要 相应引物对牙鲆 (Paralich~hysollvaceus】和石鲽 ( ．d “bicoloratus)的线粒体 16S rRNA基 因片段进 行 了PCR扩 增 ，PCR产物 经 T 载体 连接 之后进 行 了克隆 、测序 均得到 r 59obp的碱基序列，并将其与 GenBank中牙鲆线粒体全序列相应片段和 川鲽 (Platichthys “) 相应 片段进行 比较 ，结果表明．川鲽和石鲽序列差异很 小 (核苷酸差异数为 7同拣性 为 98．8 )； 而牙鲆与川鲽和石鲽的序列差异明显 【核苷酸差异数为 90--93，同源性约为 84 )．且大多数核苷 酸变异位点集中在序列中部大约 2OObp的区域 。 关键词 牙鲆 ；石鲽；．il鲽；16SrRNA基因}序列 中囝法分类于 Q178．53~Q953 文章编号2001)05713-05 鲆鲽类是我国沿海主要的经济鱼类类群之一．产量高，资源量大 ，生物多样性丰富 。我国北 方常见种类有牙鲆 、桂皮斑鲆 、石鲽 、黄盖鲽 、星鲽 、木 叶鲽 、油鲽等多种 ，是重要 的渔业资源和 养殖对象 。 近十几年来 ，由于过度捕捞 (包括过密渔具的使用)及人类活动对海洋环境的污染和对鱼 类生存环境的破坏，已使鲆鲽鱼类资源量锐减，产量降低 ，个体小型化，种质资源也受到一定威 胁 。因此 ，对鲆鲽鱼类采取一定 的资源保护措施 ，进行 台理利用 ，使之成为可持续发展渔业是我 们当前应该采取的策略 。对现有群体进行遗传 多样性检测和评价+是有根据地进行种质资源的 管理与保护的前提之一，也是养殖业发展和养殖种类遗传改 良的需要 。另一方面 ，鲆鲽鱼类是 鲽形 目鱼类 中种类较丰富的类群 ，与众所共知的渔业重要性相 比，人们对其分类区系、系统发 生、尤其是分子水平的系统发生认识相对较少 ，许多方面至今仍存在争议 。因此 ，利用遗传多样 性检测技术 ，寻找台适的遗传标记 ，认识其演化关系，是当前研究鲆鲽类系统发生的趋势。本文 研究了牙鲆科和鲽亚科常见种类… 牙鲆和石鲽的 16SrRNA基 因片段序列 ，并将其与 Gen Bank 中牙鲆线粒体全序列相应片段和川鲽相应片段进行 比较 ，以期为鲆鲽鱼类的分子水平 的系统学研究和遗传多样性研究奠定基础 ， 山东省 自然科学基盘 ／YSO0OD04)和 国家重点基础研究专项经费项 目(资助 收稿 日期 ：2000—09l3；修订 19期；2001一o6l3 孔晓瑜，女 1962年 3月出生 硕士，副教授 ， 维普资讯 青 岛 海 洋 大 学 学 报 l材料和方法 1．1实验材料 牙鲆和石鲽样 品购 自农贸市场 ，鉴定后取肌 肉组织提取 DNA或一20(、保存 后提 取 DNA 1．2实验方法 1．2．1总 DNA提取 取大约 0．1g肌 肉组织 ，尽量剪碎 ，用 DNA 提取试剂 盒 (PureGene． Gentra公司)提取基因组 DNA．TE溶解后 20C保存备用 。… 1．2．2PCR扩增 引物 16sAR／BR序列为 ：16sAR：5’GccTGTTTATcAAAAAcAT3’： 16sBR：5’ccGGTcTGAAcTcAGATcAcGT 3 。PCR扩增在 PTC 100型 PCR仪 (MJ Res