E-钙粘素在大鼠阿霉素肾病动物模型中的表达和意义.pdfVIP

E-钙粘素在大鼠阿霉素肾病动物模型中的表达及意义 中文摘要 目 的：E-钙粘素(E-cadherin)是钙依赖性细胞间连接的细胞粘附分子之一，主要存在于 人和动物的上皮细胞中，参与形成和维护正常细胞间的连接。其在肾内分泌的不平衡， 可造成肾小球足细胞和基底膜连接的损害，使足细胞从肾小球基底膜上脱落。本研究建 立大鼠阿霉素肾病（adriamycin-induced nephropathy ）模型，通过组织病理学观察、免疫 组化和RT-PCR方法，动态观察肾小球足细胞中E-cadherin 的表达，探讨E-cadherin变化在 肾小球疾病中的作用及临床意义。 方 法：1.阿霉素肾病动物模型的建立：选取清洁级雄性SD大鼠84只，随机分为两组： 对照组、阿霉素肾病组，肾病组大鼠经尾静脉一次性注射阿霉素注射液（浓度2mg/ml ， 7.5mg/kg剂量），复制阿霉素肾病模型；正常对照组尾静脉一次性注射等体积的生理盐 水。各组大鼠分别于建模后第1周、2周、3周、4周、6周、8周、12周宰杀，每组各6只， 留取肾脏标本，处死前于大鼠内眦静脉采血约3ml，离心分离血清测血浆白蛋白、尿素 氮、肌酐。大鼠处死前1天代谢笼收集24小时尿液，测24小时尿蛋白定量。2. 电镜下观察 足细胞形态改变，进行HE 、Masson 、PAS染色，光镜下观察肾脏病理改变情况。3.采用 全自动生化分析仪测定血浆白蛋白，采用磺基水杨酸法测24小时尿蛋白定量，分析各组 间血浆白蛋白、24小时尿蛋白的变化。4.用免疫组化技术检测E-cadherin 、基质金属蛋白 酶-9 （MMP-9 ）和纤维连接蛋白（FN ）在阿霉素肾病模型肾小球内的表达，分析不同时 间点各组间E-cadherin、MMP-9 、FN在肾小球内的表达情况，探讨其表达量与肾小球足 细胞损伤程度之间的关系；5. RT-PCR方法检测肾皮质内E-cadherin 的mRNA 的表达，从 分子水平探讨E-cadherin与肾小球疾病的关系。 结 果：1.阿霉素肾病组大鼠前 4 周均出现大量蛋白尿、低蛋白血症，第 4 周电镜下可见 肾小球足突广泛融合，与临床微小病变性肾病相似；第 8 周部分肾小球发生局灶性硬化， 与临床局灶节段性硬化相似；2.与对照组相比，肾病组 24 小时尿蛋白定量从第 1 周开始 增加，随着时间的延长，尿蛋白有逐渐增加的趋势，同时肾病组血浆白蛋白从第 1 周开 始下降，呈时间依赖性递减，与对照组相比，差异均具有统计学意义（p0.01 ）；前4 周肾病组大鼠血尿素氮、肌酐无明显变化，第 6 周末升高，随着实验周数的增加，升高 更明显，呈现时间依赖性，12周末达最大值，差异有统计学意义（p0.05）；3. 肾组织 形态学与病理学改变：肾病组大鼠肾脏体积稍大，颜色深红，切面皮髓质分界也清楚， 电镜可见肾小球足突融合或消失，有微绒毛的形成；光镜下显示：前2周肾小球无改变， 肾小管可见脂肪变性，随着病程进展，足细胞肿胀明显，并有小新月体形成及球囊壁纤 维化，8周时出现系膜细胞轻度增生，部分大鼠有肾小球毛细血管襻节段性硬化伴肾小 管萎缩；随着病情进展病变加重；4.免疫组化：① E-cadherin 的表达：与对照组相比， 肾病模型组第3 周时 E-cadherin 在肾小球内足细胞的表达开始下降，并随时间的延长， 表达逐渐减少，12 周最低，差异有统计学意义（p0.01 ）；② MMP-9 的表达：MMP-9 在肾小球的表达主要位于足细胞和内皮细胞，与对照组相比，肾病组第 1 周末表达开始 - 5 E-钙粘素在大鼠阿霉素肾病动物模型中的表达及意义 上调，第 3 周末达高峰（p0.01 ），后随时间的延长，表达逐渐减少，与对照组相比， 差异有统计学意义（p0.05 ）；③ FN 的表达：在肾病组第 1 周，FN 的表达轻度上调， 随着实验周数的增加，FN 在肾小球系膜区内的表达逐渐增加，12 周达高峰，与对照组 相比，差异有统计学意义（p0.01 ）；5. RT-PCR: 肾组织E-cadherin 的mRNA 表达从第 3 周开始减少，至第 12 周降至正常组的 1/5，与对照组相比，差异有统计学意义(p0.01)； 6. 相关分析结果显示：随着病变进展，E-cadherin 及其 mRNA 在肾小球足细胞内的表达 逐渐减少，FN 在肾小球系膜区的