FoxO3a转录因子对慢性粒细胞白血病K562细胞增殖、凋亡及诱导分化作用的研究.pdfVIP

中文摘要 摘要 慢性粒细胞白血病一旦发展至急变期，预后极差，目前的各种治疗方法均不 能有效控制其病情进展，多在数月内死亡，因而加强对急变期的研究具有很重要 的科学及临床意义。急变发生机制中，BCR-ABL融合基因大量表达、继发性多 种基因突变以及凋亡受阻、耐药等机制逐渐已经被阐明，但有关分化障碍的机制 研究很少且不明确【l；2】。分化障碍往往与信号通路中的转录因子异常有关， 路的下游因子，而其在慢粒急变中的功能失活，可能在慢性粒细胞白血病的发生 发展中发挥重要作用，值得进一步研究。 目的：研究Fox03a去磷酸化激活或过表达后，对慢粒急变细胞K562细胞 株的增殖、凋亡及诱导分化作用，明确Fox03a是否具有诱导慢粒急变细胞分化 作用，并研究Fox03a与造血分化调控因子砌l、BTGl基因的关系，初步探讨 Fox03a对慢粒分化障碍的机制，有利于从分化障碍角度进一步明确慢粒急变的 机理，并为慢粒急变提供一个新的诱导分化治疗方法和靶点。 方法：采用基因重组技术从人单核细胞中提取I矾A反转录成cDNA，以其为 模板，使用含有酶切位点的引物进行PCR扩增，回收PCR产物，对 pIERS2．EGFP和PCR回收产物进行酶切、纯化、连接，并转化和筛选抗性细 菌克隆，提取质粒，进行酶切、测序鉴定，获得p正RS2-EGFP．Fox03a质粒。通 GeIlE 过非脂质体Fu 中的表达后，通过Cell胁BlueCell viabil时触say检测K562细胞的活性变化； 基因的表达变化；采用联苯胺染色检测K562细胞联苯胺阳性率、流式细胞术细 胞检测表面抗原GPA、CDl 相关基因嘲1、BTGl的表达情况。 结果：成功构建重组质粒p砸RS2．EGFP．Fox03a，经过酶切和测序鉴定与预 GeIlE 期目的一致。非脂质体Fu HD转染试剂介导K562细胞转染质粒 VIII 中文摘要 blue结果显示细胞增殖能力减弱(p0．05)；流式细胞术显示细胞阻滞在G0／Gl期， 并伴随着p27¨p1表达升，细胞调亡比例增加且伴随着Bim的表达升高，提示 因的表达后，联苯胺染色阳性率升高，细胞形态学趋向于成熟方向分化改变，细 胞表面GPA抗原表达升高，髓系细胞表面分化抗原CDllb较对照组及空白对照 组升高，但不如GPA抗原变化明显，，同时伴随着瑚l、BTGl基因的表达降低。 达有关。 可诱导K562细胞向红系分化，其机制可能与下调造血分化因子嘲1、BTGl的 表达有关。 关键词： FOX03a；分化；造血分化因子；K562细胞；凋亡 Ⅸ 英文摘要 ABSTRACT h雒a once toblaStic wim of CML poorpr0口osis develop phase 1arj薛 undi丘硪ntioncells．andnlereis noe饪bctivetre咖emto controlits ofBCR-ABLresultSill ofcells pro伊鼯sion．Expression growcll蠡lctofi11d印endence 锄d actiVa：ces multiplesill印aliIlgcaScades，iIlcluding廿le hnase l幽 been 3-kiIlase(P13K)／I)roteinB(PKB／c—AKDsi酬ingpatbway．n demons舡atIedtllatthemembersoftheFOXO of位mScription缸t0硌