GA6及SHP2蛋白在肝细胞癌中的临床意义及其作用机制的研究.pdf

中文摘要 中文摘要 第一部分GA6蛋白在肝细胞癌中的临床意义及其致癌机制的研究 1、实验目的：研究GA6(Hematopoietie PBX．interactingprotein)蛋白在肝 细胞癌中表达的临床意义及其在肝细胞癌中的致癌作用的分子生物学机制。 2、研究方法：纳入2000年至2007年在中国人民解放军总医院行手术治疗 NT)。构建组织芯片，通过免疫组化染色分析GA6的表达与临床特征的相关性 及其与预后的关系；纳入新鲜HCC标本49例(均含肿瘤组织及对应癌旁非肿 瘤组织)并通过Westernblot检测GA6蛋白的表达：在肝癌细胞系中，通过GA6 的过表达及干扰技术，进行生长曲线、平板克隆形成、软琼脂克隆形成、细胞 周期测定及裸鼠移植瘤等实验，研究GA6蛋白对肝癌细胞生长、增殖能力的影 响。 3、研究结果：(1)免疫组化显示HCC肿瘤组织GA6蛋白的表达明显高于 表达与HCC各临床指标之间均无相关性，生存分析示GA6的表达与HCC患者 长曲线实验、克隆形成实验、裸鼠移植瘤实验均显示，GA6可促进肝癌细胞生 长和增殖；细胞周期及相关蛋白的表达测定显示，GA6可影响细胞周期调节蛋 白的表达，使大量细胞通过G2／M期检测点，进入M期分裂，从而促进肿瘤细 胞增殖。 4、结论：体内与体外研究显示，GA6可促进肝癌细胞的生长与增殖；免 疫组化显示，HCC肿瘤组织中GA6蛋白的表达明显高于癌旁组织，但与患者 预后无关。GA6在肝细胞癌中的作用仍有待进一步研究。 关键词：肝细胞癌，GA6(Hematopoietic PBX-interactingprotein)，免疫组织化 学 I 中文摘要 第二部分SliP2蛋白在肝细胞癌中的临床意义及其与YAP2相互作用的研究 l、研究背景：研究发现蛋白酪氨酸磷酸酶SHP2(Src2domain homology 2)在多种恶性肿瘤中发挥了癌基因的作 containingphosphotyrosinephosphatase 用，但近年来对其抑癌作用也有报道，本研究室在前期研究中通过质谱分析发 互作用。本研究的目的是在大样本临床标本中检测SHP2表达的临床意义，并 通过细胞培养及分子生物学技术研究SHP2与YAP2的相互作用。 2、研究方法：纳入2000年至2007年在我院行手术治疗的肝细胞癌临床标 本(每例均有肿瘤组织T及相应的癌旁非肿瘤组织NT)共333例，构建组织 芯片，行免疫组化并进行生存分析与Cox多因素分析研究。收集3l例新鲜临 床HCC标本，行Western 磷酸酶蛋白家族的作用机制，构建2种SHP2的底物捕获突变体，运用过表达、 底物捕获Co．IP、双荧光素酶报告基因系统及酪氨酸磷酸化等多种技术研究在 工具细胞系中SHP2对YAP2的调控作用。 3、研究结果：在肝细胞癌中，相对于癌旁非肿瘤组织，肿瘤组织中SHP2 蛋白及其mRNA的表达均明显降低，肿瘤组织SHP2的蛋白表达阳性率为 0．420-0．939)。 预后差的一个独立危险因素(P_o．023，HR：0．628，95％Ch 通过细胞培养及分子生物学技术，我们发现SHP2蛋白与YAP2蛋白确实存在 Y：舯2的表达、活性及酸磷化水平的影响不显著。 4、结论：尽管PTPNll一直被认为是一个原癌基因，但SHP2蛋白在肝细 胞癌中发挥抑癌作用并可作为一个新的预后指标。SHP2蛋白与YAP蛋白存在 较弱的相互作用，但这可能并不是其抑癌作用的主要机制。由于SHP2的对肿 瘤的作用具有组织特异性，基于人类PTPNll基因的靶向治疗及SHP2在肝细 胞癌中的作用仍有待进一步的研究。 中文摘要