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山西医科大学硕士学位论文 Gli-1 siRNA 对 PANC-1 增殖及凋亡的影响 摘要 研究背景 胰腺癌是一种较常见的消化系统恶性肿瘤，在恶性肿瘤死亡人数中排名第 四位。其恶性程度高，死亡率高，术后复发率高，5 年生存率不到 3% 。胰腺癌的发生和多 个信号通路的激活和失活存在联系，其中 Hh-Gli 信号通路在胰腺癌的发生、发展中起着关 键性的作用。Gli 作为 Hh-Gli 信号通路的终末分子，在肿瘤研究中受到广泛的关注，肿瘤 组织内 Gli 转录因子表达水平存在显著的提高。脊椎动物中有三种 Gli 转录因子 （Gli-1、 Gli-2 、Gli-3 ）, Gli-1 mRNA 的表达水平在反映Hh-Gli 信号通路活性程度时是的一个可靠 指标。利用小干扰 RNA 阻断 Gli- 1 核转录因子成为胰腺癌治疗的一种全新策略。本研究以 Gli-1 siRNA 转染胰腺癌细胞 （PANC-1 细胞系），观察其对靶细胞增殖及凋亡的影响。目 前，基因干预治疗成为肿瘤治疗研究中的新热点，并取得了可喜成果，对胰腺癌分子生物 学机制的研究显得十分重要，通过本实验的研究进一步为临床应用提供新的思路和方法。 目的 以Gli-1 siRNA 转染胰腺癌细胞系 PANC-1，研究其阻断 Hh-Gli- 1 信号通路的作 用效果，并观察其对靶细胞增殖及凋亡的影响。 方法 PANC-1 胰腺癌细胞株做传代培养，随机 PANC-1 细胞分为实验组，阴性对照组， 空白对照组。实验组以 Gli-1 siRNA 转染 PANC-1 细胞，阴性对照组以nonspecific control siRNA 转染PANC-1细胞，空白对照组PANC-1细胞给予不含抗生素的无血清的高糖DMEM 细胞培养液，转染后 24h 后，各组细胞采用 RT-PCR 检测 Gli-1 表达水平的变化，MTT 法 测定细胞生长曲线观察细胞增殖的情况。 结果 Gli-1 siRNA 转染胰腺癌细胞系 PANC-1 后，PCR 结果显示：实验组相对于阴性 对照组，Gli-1 siRNA 明显减少Gli-1 mRNA 的表达(P＜0.05)，具有统计学意义；实验组相 对于空白对照组，Gli-1 siRNA 明显减少Gli-1 mRNA 的表达(P＜0.05) ，具有统计学意义; 阴 性对照组和空白对照组 Gli-1 mRNA 的表达没有明显变化(P ＞0.05) 。MTT 结果显示：实验 组相对于阴性对照组，细胞增殖受到明显抑制(P＜0.05) ，具有统计学意义；实验组相对于 空白对照组，细胞增殖受到明显抑制(P＜0.05)，具有统计学意义；阴性对照组和空白对照 组细胞增殖没有明显变化(P ＞0.05) 。 结论 实验初步证明 Gli- 1 在 Hh-Gli 信号通路中发挥着重要作用，Gli-1 siRNA 可以通 过有效的阻断 Gli-1 mRNA 的转录，阻止下游基因的表达，从而抑制 PANC-1 的增殖并诱 导细胞凋亡。 【关键词】胰腺癌，转染，Gli-1，Hh I 山西医科大学硕士学位论文 Proliferative and Apoptotic Effects of Gli-1 siRNA on PANC-1 Abstract Background Pancreatic carcinoma is a common malignant tumor of digestive system,which is high malignant, mortality and r