Pinl在骨肉瘤细胞中的表达和对细胞周期的影响.pdfVIP

删愀螋 Pinl在骨肉瘤细胞中的表达及对细胞周期的影响 研究生：周路 专业：心血管内科 导师：杨曙光教授 中文摘要 目的 肿瘤的发生是在基因和蛋白水平上多步骤、多因素的过程，最终导致不可控制的 细胞增殖、转化和死亡。蛋白质丝／苏．脯氨酸位点的磷酸化在细胞周期的调控及转化 过程中起到关键的作用。Pinl是一种肽基脯氨酰顺反异构酶，它拥有两个功能结构区， 一个为肽基脯氨酰异构酶活性区，可以催化蛋白质异构功能：另一个为色氨酸．色氨 酸结构区，可以介导Pinl结合底物中磷酸化的丝／苏一脯氨酸位点。Pinl通过与磷酸化 的丝／苏．脯氨酸位点结合，引起蛋白质构像改变，使其活化。Pinl引起的构像改变对 因子都有催化活性，因此在细胞周期的进展，亚细胞核内转录定位，RNA的合成和 细胞生长及分化的调控中都起着重要作用。目前国内外关于Pinl在人骨肉瘤组织中的 表达情况及其与eyclinDl的相互关系的研究甚少，本实验通过研究入骨肉瘤和正常 方法 1．采用免疫组织化学染色及WesternBlot对25例人骨肉瘤中Pinl蛋白水平的表 转染入腺病毒载体中，并通过DNA自动化测序进行测定。3．对入骨肉瘤细胞系Saos．2 及U2-OS进行Pinl腺病毒转染，并应用及其抑制剂胡桃醌进行处理，收集处理后细 胞，用MTT法观测处理后细胞生长曲线；用流式细胞仪观测细胞周期变化；用 1的表达。 Western-Blot法检测Pinl及其底物蛋白eyclinD 结果 扩增的Pinl的eDNA经测序与基因文库一致，并可将其重组入腺病毒进行表达，重 CDK4和CDK6的表达，Pinl抑制剂胡桃醌可以对Pinl的功能起抑制作用 结论 细胞周期的进展有密切关系并且可以导致cyclinDl的升高。Pinl可能与入骨肉瘤的 发生与发展有关，有望成为骨肉瘤治疗的新靶点。 关键词：多肽脯氨酰基顺反异构酶；骨肉瘤；细胞增殖；腺病毒表达载体：细胞周 期；细胞周期素D 2 0FPROLYLISol垤ERASEPINlIN EXPRESSION oSTEoSARCOI讧AANDTHEEFFECToFREGULATIoNoN CELLCYCLE Zhou uate： Lu Postgrad Medicine Major：Cardiovascular Tutor： YangShuguang ABSTRACT Objective is at a andmultifactorialboⅡl and Oneogenesismultistep processgeneticepi—genentic in resultsuncontrolledcell celldeath． levels，that of onserine／threonineresidues Phosphorylationproteins preceding isa