PPO基因沉默对人恶性黑素瘤细胞A375增殖影响的实验探究.pdfVIP

目 录 中文摘要……………………………………………………………………1 英文摘要……………………………………………………………………4 研究论文PPO基因沉默对人恶性黑色素瘤A375细胞增殖影响的实验研 究 前言…………………………………………………………………8刖舌………………………………………………．．………………．8 材料与方法…………………………………………………………9 结果………………………………．．．………………………………l7 附图…………………………………………………………………19 附表…………………………………………………………………29 讨论…………………………………………………………………31 结j沧…………………………………………………………………38 参考文献……………………………………………………………35 综述基因沉默治疗恶性肿瘤的研究进展………………………………39 致{射……………………………………………………………………… 49 个人简历…………………………………………………………………50 中文摘要 PP0基因沉默对人恶性黑素瘤细 胞A375增殖影响的实验研究 摘 要 目的：恶性黑色素瘤(malignant 嵴的黑素细胞恶性肿瘤，发病率占皮肤恶性肿瘤的第三位(6．8％～20％) n】，是皮肤科领域最常引起死亡的恶性肿瘤。恶性黑色素瘤的恶性程度 高，发生转移早，预后严重，治疗的关键是早期诊断、正确分期；对于早 期非侵袭性的病变，手术彻底清除病变为最佳治疗选择；对于晚期患者， 主要治疗为化疗及免疫治疗等。化疗药物可单用或联合应用【21，但目前的 治疗方法仍不理想，且免疫疗法仍处在试验阶段。 and PPO(prolif．erationphospho巧lation 用克隆筛选技术找到的一个新的癌基因，该基因位于1p36区，编号为 ⅪAA0090， 子，编码993个氨基酸。研究发现该基因在多种恶性肿瘤癌组织中都有高 表达，与细胞增殖和磷酸化关系密切，能够使MA】PK通路中的ⅧK1 aIld phospho拶lationoncogene)。 I矾A干扰技术是今年来发现的从基因水平治疗肿瘤的新方法。I必A 干扰(砒寸A RNA，ds砌蛆)诱发的基因沉默(gene 发现的从基因水平治疗肿瘤的新方法。某些恶性黑色素瘤演变后，对化疗 诱导的细胞凋亡、抑制癌基因的表达产生抵抗。RNA干扰技术为治疗对 化疗产生耐药性的恶性黑色素瘤开辟了新的途径。 鼠。取小鼠脾细胞进行体外培养，利用骨髓瘤细胞与脾细胞融合后，寻找 杂交瘤抗体进行克隆化。单克隆抗体用免疫扩散的方法行Ig亚类测定。 克隆化的杂交瘤细胞给小鼠腹腔注射，抽取腹水后使抗体纯化，制作完成 了PPO抗体。并用免疫印迹法检测PPO基因在恶性黑色素瘤组织中表达 生长增殖，有待进一步研究． 方法： l细胞培养 将A375细胞培养于含10％胎牛血清的DⅧM培养基(含青霉素 的培养箱内常规传代培养。 2倒置相差显微镜观察A375细胞细胞分化及形态。 100时，腺病毒转染A375细胞的效率及细胞分化、形态变化。 5 天、第7天对A375细胞增殖抑制的影响。 6 后第1天、第3天、第5天、第7天A375细胞早期凋亡的变化，将实验 分为阴性对照组(不加任何药物)，空转录病毒组(加入腿)，实验组(加 入同等量PPO) 7 运用统计软件SPSSl3．O对数据进行统计处理，采用单因素方差分析， 以a=o．05为显著性差异标准。 结果： 1未经腺病毒转染处理过的人A375细胞呈梭形或多角形，贴壁生长，分 布均匀，大小基本一致，增殖旺盛，核固缩现象少见。 69％、70％、70％o MOI=50时转染效率达到最大且增大MOI值转染效率不再变化，故以下 度的皱缩、破裂，细胞生长状态不佳，有的细胞变狭长两端出现伪足，漂