RNAi沉默TTF-1表达对肺癌A549细胞凋亡影响的实验探究.pdfVIP

RNAi沉默TTF．1表达对肺癌A549 细胞凋亡影响的实验研究 硕士生姓名：付美英 指导教师：王衍富教授 专业名称：呼吸内科学 摘要 目的：恶性肿瘤是危害人类健康的严重疾病之一，近年来，其发病率及死亡 率均呈上升趋势。肿瘤，从本质上来讲是一种基因病，其发生发展与基因的变异、 缺失、畸形等密切相关。因此，我们应该从基因的角度阐明肺癌发生、发展的机 制并寻找有效的治疗靶点。现代分子生物学技术的发展和应用为肿瘤的基因治疗 factor-1，1]陌-1) 开辟了新的途径。最近甲状腺转录因子．1(thyroidtranscription 作为肿瘤基因治疗靶点受到瞩目，它在肿瘤特别是在甲状腺和肺部肿瘤的发生和 发展过程中起到一定的促进作用。该基因属于NKX．2基因家族，是一种DNA结 合蛋白，分子量约38KD，由常染色体14q13的单一位点基因编码产生，参与人类 肺、甲状腺和间脑组织胚胎发育中多种基因的转录，因此在这些组织细胞分化和 形态发生过程中起着重要作用。在肺组织中，1]rF．1可控制对肺组织发育和形态构 成起关键作用的表面蛋白A、B、C及Clara细胞分泌蛋白基因；在甲状腺组织中 可激活一些基因启动子如甲状腺球蛋白(TG)、甲状腺过氧化物酶(TPO)及甲状 腺激素受体(TSHR)等的转录活性。目前的研究结果表明1]陌．1只在肺肿瘤和甲状 腺肿瘤中存在特异性高表达，作为一种特异性核转录因子和DNA结合蛋白，1vrF．1 可能是通过与目的基因核转录蛋白结合位点的结合，或者改变DNA结合蛋白的反 siRNA至人腺 应性从而正向或负向影响基因的转录。本研究旨在探讨转染rrF—l 癌A549细胞，观察转染后A549细胞形态学变化，流式细胞术检测细胞凋亡情况， I弭PCR测定们陌．1基因在mRNA水平的表达，免疫荧光法测定转染前后蛋白的 表达。 方法： 人工合成TrF．1基因的siRNA的片段，并将其转染至肺腺癌细胞株 A549。倒置显微镜下观察细胞形态学变化：流式细胞术检测各组细胞凋亡指数； rrF．1蛋白的表达。 结果：倒置显微镜观察转染前后细胞形态学变化：转染前，细胞贴壁生长， 状况良好，多为梭形，大小适中，核仁清晰。转染后48小时，形态不规则，细胞 皱缩，帖壁不佳，细胞突起消失。流式细胞术检测结果显示，细胞凋亡率”陌．1 ％。说明转染”陌．1siRNA特异性抑制盯陌．1，可以诱导细胞凋亡。RT-PCR检测 1]陌．1 mRNA表达，结果显示，TrF．1 表达显著下调，而空白对照组、阴性对照组11下．1mRNA表达无明显变化。说明 ”陌．1siRNA可特异性阻断阿7．1mRNA表达。免疫荧光检测1]陌．1抗体表达， 转染前各组抗体表达明显，呈铺路石样分布；转染后蛋白表达显著下降。 结论：应用RNA干扰靶向抑制1]限．1基因表达可以显著促进A549细胞凋亡， 可能成为肺癌基因治疗的新靶点。 关键词：甲状腺转录因子．1 siRNA肺癌 2 RNAi oftheTTF··1 induces inthe silencing gene apoptosis A549cancercellline lung Master candidate：Fu degree Meiying Yanfu Supervisor：Professor：Wang Major：Respiration Abstract