RNAi沉默血管平滑肌细胞Rab5a蛋白抑制血管内膜增生的实验探究.pdfVIP

血管内膜增生的实验研究 摘 要 目的：血管内膜增生(IntimaHyperplisa，IH)是血管重建术(血管移植、 动脉球囊成形术等)后严重而常见的并发症，常导致血管的再狭窄。业已证明， 血管平滑肌细胞(VSMC)的增殖和迁移是血管内膜增生病理过程中的早期表现， 也是其关键一环。在我们既往的研究中发现血管平滑肌细胞中Rab5a蛋白表达有 明显升高。本研究探讨RabSa蛋白与血管内膜增生的关系，通过RNAi技术沉默 Rab5a蛋白表达，抑制血管平滑肌细胞增殖和迁移，以期达到抑制内膜增生的目 的。 方法：(1)通过颈静脉桥接移植颈动脉方法建立大鼠血管内膜增生模型， 口组织中Rab5a蛋白的表达情况，并绘制血管内膜增生时间-Rab5a蛋白表达曲 线；扫描电镜观察吻合口血管内膜中平滑肌细胞超微结构的变化。 (2)自大鼠胸主动脉分离血管平滑肌细胞并通过离体培养、传代，利用 realtime 化；利用流式细胞仪和Transwell技术，检测RNAi前后血管平滑肌细胞增殖及 迁移能力的改变。 结果：(1)吻合口血管的内／中膜比例提示动物模型血管重建术后内膜增 生明显，检测组织OPRab5a蛋白的表达在术后14天达到峰值。 (2)培养、传代的血管平滑肌细胞中Rab5a蛋白表达明显上升；利用RNAi 能有效下调Rab5a的表达。 (3)在体外实验中，下调Rab5a蛋白表达有抑制血管平滑肌细胞的增殖和 迁移的作用。 结论： (1)内膜增生过程中血管平滑肌细胞异常表达Rab5a蛋白。 (2)在体外实验中，通过RNAi下调RabSa蛋白表达，可以抑制平滑肌细胞 增殖、迁移。 (3)Rab5a蛋白与血管内膜增生有关，为研究血管内膜增生的病因学，提供 了新的理念；为预防和治疗血管重建术后再狭窄，寻找新的思路，提出了基因治 疗、分子治疗策略的新证据。 关键词： Rab5a，血管平滑肌细胞，血管重建术，内膜增生，RNAi 4 RNAiInhibitIntimal Rab5aof Silencing by Hyperplasia SmoothMuscleCells Vascular Abstract and ofvascularsmoothmusclecell migrationproliferation objective：The in ofintimal andcrucialevents hyperplasia，the ⅣSMC)areearly pathogenesis vascularreconstruction．Wetestedthe ofrestenosisafter cause hypothesis primary oftheRab of of member that Rab5a，a family prototypical down．regulation