RNA干扰抑制MACC1对大肠癌细胞增殖及其及上皮-间质转化关系的研究.pdfVIP

目录 中文摘要……………………………………………………………1 英文摘要……………………………………………………………2 缩略词表……………………………………………………………4 前 言……………………………………………………………5 材料方法……………………………………………………………8 结 果……………………………………………………………19 讨 论……………………………………………………………25 结 论……………………………………………………………32 参考文献……………………………………………………………33 致 谢……………………………………………………………39 综 述……………………………………………………………40 参考文献……………………………………………………………47 RNA 干扰抑制MACC1 对大肠癌细胞增殖及其与 上皮-间质转化关系的研究 中文摘要 目的: 探讨采用RNA干扰方法抑制MACC1基因表达对大肠癌细胞SW620增殖及 上皮间质转化的影响。 方法：本实验用脂质体LipofectamineTM2000介导，将设计并合成的靶向MACC1 特异性的MACC1- siRNA转染入人结肠癌细胞株SW620，同时设立阴性对照和空 白对照。倒置显微镜下观察各组细胞的形态学变化。MTT检测细胞增殖活性的变 化情况，并绘出各组细胞的生长曲线。采用 Western blot 技术检测 空白组（正 常非转染组）、阴性对照组和 MACC1 siRNA 组细胞 E-cadherin 和 Vimentin 的表达。细胞免疫荧光染色观察 E-cadherin 和 Vimentin 在SW620 细胞中 MACC1干预下的表达。激光扫描共聚焦显微镜观察鬼笔环肽染色后细胞骨架微 丝的变化。 结果：SW620 细胞瞬时转染效率约为 70-80% 。倒置显微镜下观察发现，转染 MACC1-siRNA 后，SW620 细胞增殖明显减弱，细胞数量减少。MTT 结果显示， 与阴性对照组和空白对照组相比，RNAi 组细胞增殖能力明显减弱(P 均0.05) 。 Western Blot 结果显示：与对照组相比，MACC1 siRNA 组Vimentin 的表达显著 减弱（P ＜0.05 ），E-cadherin 的表达显著增强（P ＜0.05 ）。免疫细胞荧光结果显 示：转染 MACC1-siRNA 能显著降低 SW620 细胞的 Vimentin 的表达而促进 E-cadherin 的表达。激光共聚焦显微镜观察发现干扰MACC1 表达后SW620 细胞 表面微丝减少，变稀疏，细胞骨架发生重新排列。 结论: 以MACC1 为靶点，应用RNA 干扰技术能明显抑制人大肠癌细胞株SW620 的增殖和上皮间质转化过程，MACC1 基因可能成为大肠癌分子治疗的潜在靶标。 关键词: MACC1；RNA 干扰；上皮间质转化 1 The effect of MACC1 by RNA interference(RNAi) on the proliferation and epithelial-mesenchymal transition of colorectal cancer cell Abstract AIM: To investigate the effects of the inhibition of MACC1 expression by RNAi on the proliferation and epithelial-mesenchymal transition(EMT) of SW620 ． Methods: In this study, the specific MACC1 siRNA designed and synthet