RNA干扰抑制EphB4基因表达对胰腺癌PANC-1细胞的作用.pdfVIP

RNA干扰抑制EphB4基因表达对胰腺癌 PANC．1细胞的影响 硕士生姓名：李斌 指导教师：赵作伟教授 专业名称：外科学 摘要 目的：胰腺癌是一种恶性程度很高的消化系统肿瘤，它严重危害着人类的生 命健康。由于它发病隐匿、进展迅速，传统治疗方法的效果不能令人满意，治疗 困难，预后极差，因此研究出诊治胰腺癌的新方法显得尤为重要。近年来，随着 基因治疗技术的迅速发展以及胰腺癌相关基因研究的不断深入，胰腺癌的基因诊 断和基因治疗正在进一步的探索中。 肿瘤的血管生长及形成是促进肿瘤发生发展和侵袭转移的重要因素，所以抑 制胰腺癌的血管形成，降低胰腺癌组织中的血管含量，阻止其快速增长就显得尤 为重要。EphB4受体促进了血管内皮细胞的增殖、迁移和管腔形成，参与调控胚胎 期血管形成过程中的动静脉分化。目前，有文献报道EphB4受体在胰腺导管细胞 癌中的高表达与肿瘤血管的生成及侵袭性有密切相关性。 序列互补的mRNA，诱导该mRNA的降解，沉默该基因的表达，属于转录后水平 的基因沉默。目前，它的应用范围非常广，可用于肿瘤基因功能分析和调控信号 转导通路等方面，为肿瘤的基因治疗提供新的目标和途径。 后，研究RNAi对PANC．1细胞EphB4基因的表达和细胞增殖、迁移行为的影响，为 以后进一步研究胰腺癌基因治疗提供基础。 方法：①软件分析EphB4基因的mRNA结构，筛选出拟干扰靶位点，构建 Western．blot分别测定EphB4mRNA和EphB4蛋白的相对含量，观察各重组质粒 瞬时转染PANC．1细胞后对EphB4基因表达的影响；④MTT测定细胞增殖能力； ⑤划痕迁移实验检测细胞的迁移能力。 mRNA的表达水平较空白组、脂质体组、干扰质粒组和脂质体+对照 胞中EphB4 质粒组显著下降(P0．05)；空白组、脂质体组、干扰质粒组和脂质体+对照质粒 质粒组PANC．1细胞中EphB4蛋白的表达水平较空白组和脂质体+对照质粒组显 著下降(P0．05)；空白组和脂质体+对照质粒组两组间比较，差异不明显(P 0．05)；④抑制EphB4基因的表达使PANC．1细胞的增殖能力有所减弱，细胞的迁 移能力与对照组比较有所下降。 结论：成功构建靶向EphB4的siRNA真核表达载体并有效转染胰腺癌 和蛋白表达，同时PANC．1细胞的体外增殖和迁移能力明显下降。 关键词：胰腺癌PANC一1 RNA干扰 EphB4 2 RNAinterference Theinfluenceof EphB4 suppression of cancer forthePANC—-1cells expression pancreatic Bin Master candidate：Li degree ZhaoZuowei Supervisor：Professor or：Surgery Maj Abstraet isa tumorof cancer malignant digestivesystem，and