RNAi沉默Notch1、Notch2对人胶质瘤U251细胞增殖的影响和其机制.pdfVIP

摘 要 神经胶质瘤是最常见的颅内肿瘤，高级别胶质瘤的预后通常很差，因此，探 讨胶质瘤的分子机制，研究新的靶向治疗手段就显得十分重要。Notch信号是胶 质瘤发病机制的新研究靶点。为深入了解Notch信号通路在神经胶质瘤发生中的 作用，探讨沉默Notch治疗神经胶质瘤这一可能的基因治疗方法，本研究利用 的胶质瘤细胞单克隆，对其体内外增殖能力进行研究，并采用基因表达谱芯片技 术，分析沉默Notchl对胶质瘤U251细胞的基因表达谱的影响。此外，本研究 胶质瘤中功能的异同点。 siRNA序列，构建 本研究的第一部分采用实时定量PCR筛选有效的Notch2 本研究的第二部分采用本实验室原有的Notchl．shRNA慢病毒和第一部分生 Notch2的细胞单克隆，实时定量PCR检测Notchl和Notch2mRNA的表达， 和Notch2稳定沉默的U25l细胞单克隆。 本研究的第三部分采用CCK．8法测定细胞生长；平板克隆形成实验和软琼 脂克隆形成实验检测细胞的集落形成能力；裸鼠种植瘤模型观察Notchl沉默对 种植瘤生长的影响。结果显示Notchl稳定沉默组的增殖与对照组相比明显减慢； 沉默组软琼脂集落形成率(5 统计学分析均有显著意义。而Notch2沉默对细胞增殖无影响。 本研究的第四部分采用基因芯片技术，分析Notchl稳定沉默对U251基因 表达谱的影响。结果显示Notchl稳定沉默细胞与对照细胞间的差异表达基因共 有775个，涉及细胞增殖与分化、细胞周期、细胞通讯与粘附、糖脂代谢、MAPK 信号转导、TGF．p信号转导等多个方面，而Notchl沉默抑制肿瘤的机制可能和 细胞周期调控以及TGF—D信号有关。 关键词： Notch信号神经胶质瘤RNA干扰慢病毒细胞增殖基因芯片 2 Abstract tunlors．The for Gliomasarethemostcommonintracranial prognosispatients with is is to the very analyze high．gradegliomasgenerallypoor．It important molecularmechanismsof andto new gliomas develop was andtheNotch ofNotch and concerned signaling relationshipsignalinggliomas interestofthe Wasseemedtobeanew of had therapies．Therefore，we targetglioma ofNotch in knockeddowntheNotchl role gliomas．We by signaling thestabletransduced lentivirus．mediatedRNAinterference andscreened