RNA干扰C1QBP表达逆转绒癌化疗耐药性的探究.pdfVIP

摘要 背景和目的：绒癌是发生于育龄女性的高度恶性实体瘤，对化疗敏感。发生化疗耐 药是其治疗失败的主要原因。深入了解绒癌耐药机制以逆转绒癌耐药具有重要临床 意义。自噬是细胞应对代谢压力的重要分解反应，降解细胞中去折叠或聚合的蛋白 和细胞器等大分子物质，维持细胞内稳态，与多种疾病的发生发展密切相关。有研 究证实自噬促进肿瘤细胞对化疗耐药，抑制自噬可能逆转肿瘤耐药。C1QBP是一种 多功能蛋白，本课题组前期研究已发现C1QBP在绒癌耐药细胞株中表达高于敏感细 胞株，并以调节细胞自噬的方式参与绒癌耐药，沉默C1QBP表达可能作为自噬的抑 制子用于逆转绒癌耐药。本研究拟探讨C1QBP与蛋白降解及选择性自噬的关系，并 通过动物实验进一步探讨C1QBP参与绒癌耐药的相关机制。 研究方法：构建靶向C1QBP基因的shRNA慢病毒表达载体，慢病毒稳定转染绒癌耐 blot)检测C1QBPRNA干扰效 药细胞干扰C1QBP表达；蛋白免疫印迹法(western IC50 及耐药指数(RI)的变化；行细胞裸鼠皮下成瘤，腹腔注射MTX或VPl6，观察肿瘤 体积和重量变化，构建绒癌体内化疗耐药动物模型，检验沉默C1QBP表达对绒癌细 胞体内耐药性的影响；并同时在细胞和裸鼠皮下移植瘤组织中检测自噬特异性受体 蛋白p62与ClQBP的共表达。 shRNA慢病毒表达载体并转染绒癌耐药细胞株Je93／VPC， 研究结果：成功构建C1QBP 获得ClQBPRNAi高效抑制的细胞，基因沉默效率随细胞传代递减；沉默Je93／VPC C1QBP表达显著降低细胞VPl6 down，KD)组细胞在裸鼠体内成瘤延迟，与对照组细胞相 C1QBP基因敲除(Knock 比C1QBKD组细胞VPl6作用后体积抑瘤率和重量抑瘤率均升高；在体外培养细胞 中，沉默C1QBP表达伴随p62表达上调，且P62结构表型发生变化；裸鼠皮下移植 瘤组织中均检测出自噬相关蛋白p62与C1QBP的表达。 结论2 沉默绒癌耐药细胞株Je93／VPC中C1QBP表达，在体外及体内水平均对细胞 增殖起抑制作用，并在一定程度逆转其对VPl6的耐药性。C1QBP可调节P62表达， 可能以调节细胞内蛋白降解及选择性自噬的方式参与绒癌耐药。 关键词：绒癌；化疗耐药；自噬；C1QBP：p62；RNA干扰；慢病毒载体；裸鼠移植 瘤；逆转耐药。 4 Abs订act and a but BackgroundObjective：Choriocarcinoma(CC)is highlymalignent sensitivesolidtumor chemotherapy ofreproductive—agewomen．Nowadays， chemoresistancehas becomethemainreason to S．It leadingpoorprognosi is to inits and greatlysignificant mechanism effectivemethod study exploit toreverse isa ofcel ic drug—resi lularcatabol