STAT1在人肾小球系膜细胞衰老中作用机制的探究.pdfVIP

·中文论著摘要· STATl在人肾小球系膜细胞衰老中作用机制的研究 前言 肾脏功能随年龄增长而下降，衰老是进展性肾脏疾病的重要风险之一。随着 年龄的增加，有很大一部分人发生终末期肾脏病(ESRD)，65．70岁间ESRD的发 病率为11％，而在75岁的人群中，发病率则达到14％。同时，世界人口老龄化问 至U2030年，这个数字还将翻倍。在中国，60岁以上的人占总入口的1l％(1．43亿)， 预计到2040年，将增加到24．8％(3．74亿)，其中80岁的人几乎达到l亿。老年肾 脏疾病正逐渐成为影响我们国民健康和社会发展的主要疾病，因此阐明肾脏衰老 的分子机理具有重要的理论和临床意义。 目前关于肾脏衰老的机制尚不十分明确，现认为关键细胞的衰老是器官和组 织衰老的病理基础，肾小球系膜细胞作为肾脏最重要的固有细胞，其表型和功能 的改变在肾脏衰老进程中必然发挥着重要的作用。因此寻找系膜细胞衰老的机制， 对于揭示肾脏衰老的机制有重要的指导意义。 STATl是第一个被发现的STAT蛋白，在干扰素信号中发挥重要作用，主要 使细胞生长停滞，促进凋亡。在我们先前的研究中已经证实，STATl参与了肾小 球系膜细胞衰老的过程，但其对系膜细胞衰老相关信号通路的影响和作用机制尚 不十分清楚，本研究通过本课题组前期所建立的人肾小球系膜细胞(}玎ⅥC)衰老 h，150 h， LJH202刺激l 模型即：10击molL1血管紧张素II(AngII)刺激72gmol 然后再培养71h，探讨STATl在HMC衰老过程中的的作用。观察血管紧张素II 受体阻断剂氯沙坦、抗氧化剂普罗布考及百令胶囊提取液对HMC衰老及STATl 信号通路的影响，探讨它们在延缓HMC衰老过程中的作用，以期进一步探讨肾 脏衰老的分子机制及其防治措施。 材料与方法 及p53、p21蛋白的检测 L．1刺激1 每24h补充一次，培养72h)；H202组(n202：150I．tmol h，然后换为 新鲜培养液继续培养71 h)。通过细胞形态、细胞周期及细胞p半乳糖苷酶染色阳 性率证实HMC衰老并用Westernblot法检测衰老各组细胞内STATl、p-STATl、 STAT3、p-STAT3、p53、p21蛋白的表达变化。 p21表达变化 2000转染试剂将STATl．siRNA转染入HMC。激光共聚焦显微镜鉴定转染效率， 应用Western 实验。转染有效干扰序列24 II和H202刺激相应时 h后，分别用上述浓度的Ang 间，观察各组细胞形态、细胞周期、p．半乳糖苷酶染色阳性率的变化并用Western 变化。 三、氯沙坦、普罗布考、百令胶囊提取液对HMC衰老及STATl、 p-STATl、p53、p21变化 将氯沙坦、普罗布考和百令胶囊提取液提前1h加入HMC培养液中，再用 AngII或H202刺激相应时间，观察细胞周期、细胞p-半乳糖苷酶染色阳性率及各 组细胞内STATl、p-STATl、p53、p21蛋白的表达变化。 (一)AngII作用组： 2 mg AngII+百令组(百令胶囊提取液：50L-I) (二)H202作用组： 实验分组：正常对照组；H202组；H202+普罗布考组(普罗布考：40．0umolUl)。 H202+百令组(百令胶囊提取液：50mgL-1) ． 结窭 编7R 及p53、p21蛋白的表达变化 光镜下观察：正常对照组细胞呈条梭形生长，排列规则，细胞边界清晰，生 命力旺盛。与正常组细胞相比，AngII和H202组细胞排列不规则，多