STAT6圈套ODN对哮喘小鼠脾淋巴细胞IL-13表达影响的实验探究.pdfVIP

目 录 1. STAT6 圈套 ODN 对哮喘小鼠脾淋巴细胞 IL-13 表达影响的实 验研究„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„ 1 1.1 中文摘要„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„1 1.2 英文摘要„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„4 1.3 前言„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„7 1.4 材料与方法„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„10 1.5 结果„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„21 1.6 讨论„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„29 1.7 结论„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„34 1.8 参考文献„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„35 1.9 英汉缩略词对照表„„„„„„„„„„„„„„„„„40 2 致谢„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„42 3 白介素-13 与支气管哮喘的研究进展 （综述） „„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„44 1 STAT6 圈套寡核苷酸对哮喘小鼠脾淋巴细胞 IL-13 表达影响的实验研究 摘 要 目的：支气管哮喘是由多种细胞（如嗜酸性粒细胞，肥大细胞，T 细胞，中性粒细胞和气道上皮细胞等）和细胞组分参与的气道慢性炎 症性疾病，反复发作性喘息，可逆性气道狭窄和气道重塑是其主要特 征。依赖于信号转导和转录激活因子 6 （STAT6）持续活化与过度表 达，使 T 细胞向 Th2 优势分化和 Th2 分泌 IL-4 ，IL-5，IL-13 等炎性 介质，是哮喘主要的病理生理基础。本研究通过 STAT6 圈套寡核苷 酸（ODN ）和哮喘小鼠脾淋巴细胞的共同培养来观察 STAT6 圈套寡 核苷酸 （ODN ）对哮喘小鼠脾淋巴细胞 IL-13 表达的影响。方法：（1） 实验分组：将 48 只 BALB/c 雌性小鼠分成两组：Ⅰ组，正常小鼠 8 只；Ⅱ组，哮喘小鼠 40 只；其中Ⅱ组哮喘小鼠脾淋巴细胞分成 5 组： 空白对照组（A 组）、哮喘 OVA 组（B 组）、哮喘脂质体组（C 组） 哮喘圈套 ODN 组 （D 组）、哮喘无序 ODN 组 （E 组）。哮喘组用卵 白蛋白(OVA)和氢氧化铝建立哮喘模型，分别于第 0、7、14 天腹腔 注射 OVA 致敏，第 21 天至 28 天雾化吸入 5%OVA 激发，每天一次， 每次 30 分钟。正常小鼠组以生理盐水代替 OVA 。（2 ）末次激发 24 小时后，处死小鼠收集肺泡灌洗液分别行白细胞，淋巴细胞和嗜酸性 粒细胞的分类计数；HE 染色肺组织切片观察气道炎症变化。取出哮 喘小鼠的脾脏，分离脾淋巴细胞，进行体外培养并由阳离子脂质体 2000 转染剂携带合成的全链硫代修饰的 STAT6 寡核苷酸（ODN ）转 1 染细胞，再用 OVA 激发淋巴细胞使其激发活化。24 小时后离心收集 培养的脾淋巴细胞上清液并采用酶联免疫吸附（ELISA ）法测定其中 的 IL-13 含量，离心后沉淀的细胞抽提总 RNA 逆转录转为 cDNA， 建立实时荧光 PCR 反应条件进行 PCR 扩增，分析 IL-13mRNA 的相 对含量。实验数据采用均值±标准差 (x s )表示, 用 SPSS17.0 统计 软件进行统计学分析。结果：（1）Ⅱ组与 Ⅰ组比较，支气管肺泡灌洗 液中白细胞，淋巴细胞，嗜酸性粒细胞均增高，有统计学意义 (P0.01) ；（2 ）病理切片 HE 染色显示： Ⅰ组支气管上皮完整，杯状 细胞少见，基底层及平滑肌层较薄，血管及气道周围见极少量炎症细 胞，支气管管腔内无大量分泌物；Ⅱ组气管和血管周围及肺泡隔内见 大量嗜酸性粒细胞浸润，气道上皮细胞增生肥大，上皮不完整，上皮 下基底层明显增厚，气管内分泌物潴留，支气管平滑肌增生（3 ）脾 淋巴细胞 IL-13mRNA 的表达水平：空白组 （A 组）、哮喘 OVA 组(B 组) 、哮喘脂质体组（C 组）哮喘圈套 ODN 组（D 组）、哮喘无序 ODN 组（E 组）的淋巴细胞IL-