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SPARC在胰腺癌中的作用及其增加化疗敏感性的机制 目录 中文摘要…………………………………………………………………………3 英文摘要…………………………………………………………………………5 缩略词表…………………………………………………………………………7 前言………………………………………………………………………………8刚『青………………………………………………………………………………8 第一部分人SPARC基因的克隆与表达载体及siRNA载体的构建…………12 引言………………………………………………………………………………12 材料与方法………………………………………………………………………14 结果………………………………………………………………………………32 讨论………………………………………………………………………………44 参考文献…………………………………………………………………………46 第二部分SPARC在胰腺癌细胞中的作用机制………………………………5l 引言………………………………………………………………………………5l 材料与方法………………………………………………………………………52 结果………………………………………………………………………………58 讨论………………………………………………………………………………67 参考文献…………………………………………………………………………70 第三部分SPARC增加胰腺癌细胞化疗敏感性的机制………………………75 引言………………………………………………………………………………75 材料与方法………………………………………………………………………77 结果………………………………………………………………………………78 讨论………………………………………………………………………………84 参考文献…………………………………………………………………………87 综述………………………………………………………………………………92 发表论文列表……………………………………………………………………112 致谢………………………………………………………………………………113 2 SPARC在胰腺癌中的作用及其增加化疗敏感性的机制 SPARC在胰腺癌中的作用及其增加化疗敏感性的机制 中文摘要 胰腺导管腺癌是全世界范围最恶性的肿瘤之一。虽然近年在治疗上有了较大 的进步，但其总的五年生存率仍很低。这个结果促使对胰腺癌发生发展的相关机 制进一步研究显得十分必要。过去肿瘤的研究主要集中于恶性肿瘤本身的分子遗 传学及细胞自身的行为。现在对肿瘤的研究集中于肿瘤细胞与其微环境的相互作 用。在肿瘤发展的每个阶段，肿瘤细胞都与其微环境相互联系，其中细胞外基质 蛋白在肿瘤与其微环境中的相互作用中有重要作用。本研究中的SPARC (Secretedacidicandrichin protein cysteine)蛋白就是一个典型的基质蛋白。在 一些肿瘤中如黑色素瘤、胃癌，其可以促肿瘤的增殖、转移；而在另外的肿瘤中 如结肠癌、肝癌、卵巢癌中，其可以抑制肿瘤的进展。在胰腺癌中已发现SPARC 异常表达，并且其被认为其与肿瘤发生发展相关，但其作用机制仍不明。在本研 究中，我们将进一步探索SPARC在胰腺癌生长中的作用及其机制。首先我们在 胰腺癌标本和胰腺癌细胞中检测是否有SPARC的表达，然后分别在MIAPaCa2 和PANC．1胰腺癌细胞中过表达和下调SPARC的表达，检测对细胞行为是否有 影响，并且在体外和动物模型中检测SPARC对于胰腺肿瘤细胞生长的影响。结 果显示在胰腺癌病人的组织标本中，SPARC高表达，其染色阳性主要位于癌周 围成纤维细胞，恶性肿瘤上皮表达缺失。基质中SPARC高表达与病人不良预后 相关。在体外和动物模型中，在MIAPaCa2细胞中过表达SPARC抑制肿瘤细胞 生长及活体内成瘤能力；相反在PANC．1细胞中下调SPARC促进肿瘤的生长及 活体内成瘤能力。进一步的研究发现这个生长抑制作用与SPARC上调p53， 磷酸化，导致细胞周期阻滞；干扰p53蛋白作用后，部分回复了SPARC对于胰 腺癌细胞生长抑制的作用。我们的结果显示，SPARC可以通