SOCS-3在慢性肝损伤中的表达研究和大鼠SOCS-3基因真核表达质粒的构建.pdfVIP

1．7 参考文献…………………………………………………………52 1．8 英汉缩略词对照表…………………………………………………56 2 致谢…······…······…···…···……···、·······················……·．．．．．57 3 1 Y1784760 SOCS．3在慢性肝损伤中的表达研究及 大鼠SOCS．3基因真核表达质粒的构建 摘 要 of 探索细胞因子信号转导抑制因子．3(Suppressorcytokine 中的作用。通过构建大鼠细胞因子信号转导抑制因子．3(SOCS．3)基因的 重组pcDNA3．1质粒，为进一步研究该基因在慢性肝损伤的作用提供技术平 (1 2只)。模型组40％四氯化碳(Carbon 下注射建立慢性肝损伤模型，对照组以同等条件注射花生油，于第4、6、8、 ALT、AST检测，由泸州医学院附属医院检验科协助完成。5．血清肿瘤坏 死因子．IDc(Tumornecrosis 医学院附属医院核医学科协助完成。6．肝脏病理检查：HE染色，显微镜 下按KnodellHAI评分标准对肝脏炎症、肝纤维化进行评分。7．设计特异性 目的片段，采用限制性内切酶胁，zdIII和B口聊H 化感受态大肠杆菌DH5．a，后长出的克隆仍采取双酶切鉴定，阳性克隆送 上海生工生物工程技术服务有限公司测序。8．统计学方法：数据以均数士 TTest)检验，模型组与组之间采 组采用独立样本f(Independent．SaInples 用单因素方差分析(OneANOVA)。结果：1．模型组4周时肝功能无明 way 显异常，肝组织有轻微炎症表现，但很少有肝纤维化出现，6、8、10周时 肝功能明显异常，肝脏炎症较前明显加重，肝纤维化程度加重，至10周时 均有肝硬化表现，而对照组肝脏组织无明显炎症表现，也无纤维化表现。 2．慢性肝损伤模型组SOCS．3mRNA相对表达量随肝损伤程度加重而逐渐 时为O．71士o．31，10周时为O．83士O．24，模型组SOCS．3mRNA相对表达量高于 化检测肝脏组织SOCS．3蛋白表达，显示阳性染色呈棕黄色，表达主要集中 蛋白表达明显增强。通过对各组SOCS．3蛋白平均光密度值分析，显示对照 异有统计学意义(尸O．05)，对照组明显低于模型组；模型组在4、6、8、 10周与周间比较，SOCS．3蛋白的相对表达量差异有统计学意义(尸 O．05)。4．SOCS．3 及纤维化Khodell 111IⅢA HAI评分相关性分析：在慢性肝损伤时，SOCS．3 HAI评 分呈正相关。5．构建大鼠细胞因子信号转导抑制因子．3(SOCS．3)基因的 pcDNA3．1载体中，测序结果证明重组质粒载体的插入序列与设计的靶基因 序列一致。结论：1．在慢性肝损伤中，随着肝脏损伤加重，受到炎症因子 持续刺激，SOCS．3111][ⅢA及其蛋白表达逐渐增加，其表达与炎症和纤维化 程度有关。2．成功构建大鼠SOCS．3基因的真核表达质粒重组体，为进一 步研究该基因在慢性肝损伤的抑制调节作用提供技术平台。 关键词：细胞因子信号转导抑制因子．3；慢性肝损伤；实时荧光定量 RT-PCR；真核表达质粒；基因重组 The 0fSOCS-3in RatwithChronic Expression TissueOf Hepatic LiVer and Illjury theConstructionof