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SIRT1 抑制氧化低密度脂蛋白在血管内皮细胞聚集的作用及机制研究 中文摘要 SIRT1 抑制氧化低密度脂蛋白在血管内皮细胞聚集的作 用及机制研究 中文摘要 背景和目的：氧化低密度脂蛋白(oxidized low-density lipoprotein, ox-LDL)与动脉 粥样硬化形成密切相关。自噬在人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells, HUVECs)中有降解ox-LDL的作用。Sirtuin1(SIRT1)，一种新型抗动脉粥样硬化 因子，是哺乳动物沉默信号调节因子2的同源物，对细胞的生存、代谢等生理活动起 着十分重要的调节作用，可能是所有生物共同的寿命控制基因之一，并且有诱导自噬 作用。本文研究SIRT1对HUVECs 内ox-LDL聚集的影响，并初步探讨其作用是否与其 促进ox-LDL 自噬性降解有关。 方法： 1.流式细胞仪检测SIRT1抑制剂尼克酰胺(nicotinamide, NAM)和激动剂白藜芦醇 (resveratrol, RSV)对Dil-ox-LDL在HUVECs聚集的影响；利用SIRT1小干扰RNA(small interfering RNA, siRNA)转染构建SIRT1 siRNA 内皮细胞模型，并用流式细胞仪检测 其对Dil-ox-LDL在HUVECs聚集的影响。 2.利用自噬相关基因Atg5小干扰RNA转染构建Atg5 siRNA 内皮细胞模型，流式细 胞仪检测其对白藜芦醇抑制Dil-ox-LDL在HUVECs聚集的影响；采用蛋白免疫印迹方 法检测自噬流相关蛋白LC3 、p62 的蛋白含量，并用GFP-LC3质粒转染技术在荧光显 微镜下观察各组LC3荧光点的数目；通过免疫荧光技术观察HUVECs 中Dil-ox-LDL与 溶酶体标志物Lamp1和Cathepsin D的共定位情况。 结果： 1.流式细胞术检测结果显示SIRT1 siRNA和NAM增加HUVECs中Dil-ox-LDL的荧 光强度，RSV减少HUVECs 中Dil-ox-LDL的荧光强度。 I 中文摘要 SIRT1 抑制氧化低密度脂蛋白在血管内皮细胞聚集的作用及机制研究 2.敲减Atg5增加HUVECs 中Dil-ox-LDL的荧光强度；与RSV组相比，Atg5 siRNA 和RSV组的HUVECs中Dil-ox-LDL荧光强度增加。 3.免疫印迹结果显示ox-LDL升高LC3-II和p62的蛋白表达，与单独ox-LDL组相比， SIRT1 siRNA+ox-LDL组和NAM+ox-LDL组LC3-II的蛋白表达降低，p62蛋白水平升 高，RSV+ox-LDL组LC3-II的蛋白表达升高，p62蛋白水平降低。运用GFP-LC3质粒转 染技术在荧光显微镜下观察发现SIRT1 siRNA和NAM减少LC3点状物数目，RSV增加 LC3点状物数目。 4. 免疫荧光结果显示Dil-ox-LDL 与Lamp1 及Cathepsin D 部分共定位，与 Dil-ox-LDL单独组相比，SIRT1 siRNA和NAM减少Dil-ox-LDL和Lamp1及Cathepsin D 共定位程度，RSV增加Dil-ox-LDL和Lamp1及Cathepsin D共定位程度。 结论：SIRT1 抑制剂及敲减SIRT1 基因增加ox-LDL 在HUVECs 中的聚集，SIRT1 激动剂则减少ox-LDL 在HUVECs 中的聚集，SIRT1 的这种调控作用与其对自噬溶酶 体途径的调节有关。 关键词：SIRT1；氧化低密度脂蛋白；聚集；人脐静脉内皮细胞；自噬溶酶体途 径 作 者：余小艳 指导老师：曹勇军