SIAH介导的α-synuclein泛素化在其自噬性降解中的影响.pdfVIP

SIAH 介导的α-synuclein 泛素化在其自噬性降解中的作用 中文摘要 SIAH介导的α-synuclein泛素化在其自噬性 降解中的作用 中文摘要 + 目的 ( 1) 观察外源性毒素MPP 作用对SIAH活性和α-synuclein泛素化、降解通路 的影响。(2) 探讨干扰SIAH活性对细胞生存率和α-synuclein泛素化、降解通路的影响。 + 方法 取PC12细胞,分别用0.25mM、0.5mM、1.0mM MPP 及1：100 （2ug/ml ）、 1：50 （4ug/ml ）、1：25 （8ug/ml）SIAH-1抗体处理细胞24h ，采用MTT法检测细胞 + 活力，据细胞存活能力选取SIAH- 1抗体及MPP 作用于细胞的浓度，再按实验要求把 + + 实验分为空白对照组、SIAH-1抗体 （1：50 ）组、MPP ( 0.5mM)组、MPP +SIAH-1 抗体组，上述方法处理细胞24小时后，通过MTT法检测细胞活力，Western Blot检测 α-synuclein、LC3-II 、SIAH、E1在蛋白水平表达的变化，荧光定量PCR检测α-synuclein、 LC3 、SIAH、E1基因在mRNA水平表达的变化。 + 结果 ( 1) 0.25mM MPP 组与对照组细胞活力无明显差别(P=0.5570) ，差异无统计 + + 学意义，0.5mM和1.0mM浓度MPP 细胞活力均较对照组明显下降，尤以1.0mM MPP 组最显著；三种不同浓度SIAH-1抗体处理细胞后活性均增加 （P均0.01 ），且三组 + SIAH-1抗体浓度组之间细胞活力无明显差异(P均0.05) ；但在MPP 组各浓度SIAH-1 抗体处理细胞后细胞活力均明显升高 （P均0.05 ），以1：25和1：50浓度的SIAH-1 抗体效果最为明显(t值分别为5.988，3.766；P值分别为0.001，0.0093)，且此二组间细 胞活力无明显差异 （P0.05 ）。(2) Western Blot结果显示：PC12细胞加入SIAH-1抗体 后LC3-II 、α-synuclein、SIAH （t值分别为3.257 ，2.387 ，8.368，P值分别为0.0173 ， + 0.0360，＜0.0001 ）蛋白水平均下降，E 1表达升高（t=5.096，P=0.0049 ）；MPP 处理 细胞后，LC3-II蛋白水平明显增加 （P ＜0.01 ），E1(t=4.195, P=0.0247) 表达也升高， 而再加入SIAH-1抗体后明显降低了由MPP+ 引起的LC3-II表达的增高（P ＜0.0001 ）、 + 同时明显升高了E1水平 （P ＜0.01 ）；另外MPP 处理导致α-synuclein、SIAH表达的升 高（P均＜0.01 ），加入SIAH-1抗体后明显降低了SIAH及α-synuclein 的水平 （P均＜ I 中文摘要