siRNA使HIF-1α基因沉默抑制大鼠视网膜体外新生血管形成的实验探究.pdfVIP

siRNA使HIF-1α基因沉默抑制大鼠视网膜体外新生血管形成的实验研究 学科分类：儿科 研究生：白青青 指导教师：周晓光教授 中文摘要 目的 探讨缺氧诱导因子-1α(hypoxia-inducible factor -1α，HIF-1α)在早 产儿视网膜病变（retinopathy of prematurity ，ROP）发病中的作用，为ROP 的基因治疗寻找新的靶点。 方法 将化学合成小分子干扰 RNA(small interference RNA,SiRNA)用脂质体介 导法转染大鼠视网膜血管内皮细胞，转染的细胞在含化学缺氧剂——二氯化钴 （CoCl ）的培养基中培养8 h；应用荧光定量聚合酶链反应和 Western 印迹技术 2 检测转染后 HIF-1αmRNA 和蛋白的表达量，应用四甲基偶氮唑蓝比色法对细胞增 殖活性进行检测分析。正态分布计量资料用均数±标准差（x±s）表示，比较2 组间是否存在差异采用 t 检验。 结果 成功将 siRNA 转染大鼠视网膜血管内皮细胞，荧光定量聚合酶链反应技术 检测显示，4 条 siRNA 均能不同程度抑制 HIF-1α的转录表达，siRNA1、siRNA2 和 siRNA4 组 HIF-1α mRNA 分别降至空白对照组的 16.20%、20.34%和 30.49%， 与阴性对照组（83.34%）之间差异有统计学意义（t分别为 16.786、8.953和4.087， P 均＜0.05）。Western 印迹技术显示，siRNA1 和 siRNA2 转染的大鼠视网膜血管 内皮细胞 HIF-1 α蛋白表达水平分别为 0.496、0.654，明显低于空白对照组 （3.402）和阴性对照组 （3.510），差异有统计学意义（t 分别为 6.861、2.893、 4.567 和 5.072，P 均＜0.05）。siRNA1 和 siRNA2 组细胞增殖抑制率分别为 49.50% 和 67.41%，明显高于阴性对照组 （15.70%），差异有统计学意义（t 分别为 2.786 和 6.904，P＜0.05）。 结论 化学合成的 HIF-1α siRNA 能有效抑制大鼠视网膜血管内皮细胞在缺氧 条件下 HIF-1α基因及蛋白的表达，从而降低细胞增殖活性。 【关键词】 早产儿视网膜病变；小干扰 RNA；缺氧诱导因子-1α；视网膜新生 血管化 Inhibitory effects of chemically synthetic siRNA of HIF-1 α in rat retinal endothelial cells of hypoxic condition Discipline：Pediatrics Name: Bai Qing-qing Supervisor:Zhou Xiao-guang Perfessor Abstract Objective To study blocking effects of RNAi technology on HIF-1 α expression in rat retinal endothelial cells. Methods After liposome-mediated siRNA transfection of rat retinal endothelial cells ，the cells were cultured in CoCl -induced hypoxic 2 condition for 8 hours，the expression of HIF-1αmRNA was determined by fluorenscence quantitative PCR， HIF-1α protein expression was detected by Western Blot. Cell proliferation w