siRNA抑制TAK1基因对RA滑膜细胞Aggrecanase-1表达的作用.pdfVIP

·中文论著摘要· 表达的影响 目 的 代培养RA(rheumatoidarthritis；类风湿关节炎)滑膜细胞，获取高纯度滑膜 成纤维细胞，转特异性的siRNA染入RA滑膜成纤维细胞内，给予炎性刺激因素 术在RA基因治疗中的可行性。 方法 收集类风湿性关节炎病人膝关节置换术中病变的类风湿性滑膜组织，采用酶 消化法进行体外滑膜细胞的分离培养并传至3．5代，倒置显微镜下观察细胞生长 状态，通过免疫组化鉴定。定制siRNA转染试剂及转染诱导剂，制备可靠的特异 验组)，错配碱基阴性转染对照细胞组、GAPDH．siRNA阳性对照组和未转染细胞 组(对照组)。转染后对各组进行IL．1p干预，收集各组细胞上清液，ELISA方法 比较各组Aggrecanase一1(聚蛋白多糖酶·1)的释放量。 ：日结 木果 该实验4例患者的滑膜细胞标本均采用体外消化培养法成功培养，平均传代 至3～5代，细胞生长状态较好，比较稳定，大约传至第7代时细胞生长减慢，出 现老化状态。免疫组化鉴定滑膜细胞均一地表达Vimetin(95％)、表明所培养的 细胞是滑膜成纤维细胞。检测炎性刺激后实验组与对照组相比Aggrecanase．1含量 水平，以降低对关节软骨的损伤。 结 论 Takl 性关节炎奠定实验基础。 关键词 类风湿性关节炎，滑膜细胞，RNA干扰，Aggrecanase-1，TAKl 2 ·英文论著摘要· Influenceof TAKl siRNAtotheRA cells on synovial expressionofAggrecanase—-1 Obective RA transfectionand Culturingsynovial cells，preparinggood agentsTransfecting RA SiRNAinto cellstoinhibit the synovial Aggrecanase一1 expression，toprovide foundationandbasisforrheumatoidarthritistreatment andresearch． gene Methods ollect inRA tissue totalknee the synovial patientsundergoing arthroplasty,use enzyme in访trotoculture cells．CustomsiRNAtransfection digestion synovial Fibroblast-likeinto4