siRNA沉默Smad3对肝星状细胞增殖及凋亡的影响及其机制研究.pdfVIP

山西医科大学硕士学位论文 siRNA沉默Smad3对肝星状细胞增殖与凋亡 siRNA沉默Smad3对肝星状细胞增殖与凋亡 ssiiRRNNAA沉沉默默SSmmaadd33对对肝肝星星状状细细胞胞增增殖殖与与凋凋亡亡 的影响及其机制研究 的影响及其机制研究 的的影影响响及及其其机机制制研研究究 研究背景 研究背景 研研究究背背景景 肝纤维化是以肝星状细胞（hepatic stellate cell，HSC）的激活和细胞外基质（extracellular matrix，ECM）在肝内过多产生为主要特征的病理过程[1,2]，是各种慢性肝病发展至肝硬化 的必经阶段，近年来随着对肝纤维化分子生物学研究的不断深入，逐渐认识到肝纤维化是 [3] 一个可逆转的过程 。肝星状细胞的活化和增殖被认为是肝纤维化发生和发展的中心环节 [4]，近年来研究表明，逆转肝纤维化关键在于减少活化HSC的数量。 肝纤维化是一个有多种细胞因子和多条细胞信号通路共同参与的复杂病理过程。其中 TGF-β/Smads信号转导通路在肝纤维化的发生发展中起重要作用，TGF-β1被认为是肝纤维 [5] 化的最关键因素 。Smads蛋白是一种新发现的蛋白，它存在于人和动物多种细胞中，参与 调节细胞增殖、分化、胚胎发育和骨骼重建，并在细胞外基质形成、创伤修复等生理病理 过程中有重要作用，被视为目前所知最重要的TGF-β受体（TGF-β receptor or TβR）胞内激 [6] 酶底物 。目前已发现的Smads至少有8种，根据其结构和功能的不同可分为三大类：受体 调节型（R-Smads）；共同通用型（Co-Smads）；抑制型（I-Smads），其中Smad3与肝纤 [7] [8] 维化的关系最为密切 。研究表明Smad3能够促进肝纤维化的形成 。 [9] 近年研究发现 Smad3 在调节细胞增殖与凋亡的过程中发挥重要作用，张定凤 认为转 化生长因子信号转导过程中 Smad3 可以刺激 HSC 增殖，阻断其传导可能对肝纤维化的治 疗有效；刘波等[10]研究发现用 siRNA 沉默 Smad3 表达可以抑制人瘢痕疙瘩成纤维细胞的 增殖并诱导其凋亡；而 Tsai 等[11]用 Smad3 腺病毒载体转染平滑肌细胞后发现其增殖能力 增强。细胞凋亡是一系列基因激活，表达及调控等作用的结果。目前研究发现凋亡相关蛋 白 P53 和 Bcl-2 与 HSC 的凋亡有关，P53 是较早发现的与细胞凋亡相关的蛋白，可诱导细 胞凋亡，而 Bcl-2 是 Bcl 家族中的重要成员，为凋亡抑制蛋白。 RNA干扰（RNA interference，RNAi）是新近发展起来的一种封闭基因表达的有效方 法。小干扰RNA(small interfering RNA，siRNA)是发挥作用的重要中间效应分子[12]。研究 发现，阻断Smads信号传导通路可能成为一个治疗肝纤维化的新的靶点。导师刘立新 [13]的 前期研究发现用siRNA 沉默HSC 的Smad3 基因不仅可以降低HSC 表达纤维连接蛋白 (Fibronectin，FN)和I型胶原蛋白(Collagen protein I)的水平，而且可以阻止新的肝纤维化致 病因子IGFBPrP1诱导的HSC分泌ECM的增多，从而阻止肝纤维化的发展。为了明确siRNA 沉默HSC的Smad3基因是否会对HSC的增殖、凋亡以及凋亡相关蛋白P53和Bcl-2的表达产生 影响，并探讨其可能的机制，设计了此实验。