Sirt1对硬皮病模型小鼠的干预作用和其机制研究.pdfVIP

中文摘要 中文摘要 Sirtl对硬皮病模型小鼠的干预作用及其机制研究 研究背景与目的 硬皮病是一种慢性自身免疫性疾病，以多脏器炎症和弥漫性纤维化为特征。 其病因及发病机制不明，目前认为硬皮病患者的皮肤纤维化是由于成纤维细胞 过度活化导致胶原、纤维连接蛋白和糖胺聚糖等细胞外基质的沉积增加所造成。 硬皮病早期，炎症反应是其主要表现，也是进一步促进成纤维细胞活化并合成 细胞外基质的主要因素。其中，细胞因子网络失衡，如肿瘤坏死因子．alpha(tumor necrosis 种促炎症因子参与了成纤维细胞的活化。因此，抑制炎症信号通路可能有望阻 断硬皮病的病情进展。 information1，Sirtl)可能通 近期研究发现沉默调节蛋白1(silent regI．tlator 过抑制NF．r,B的转录活性，下调多种炎症相关因子的表达，从而缓解炎症。此 外，Sirtl具有调节免疫和调节细胞分化、增生的功能。白藜芦醇(resveratrol， Res)是一种多酚类天然植物抗毒素，为Sirtl的激动剂之一。研究认为白藜芦 醇有明显抑制炎症、调节免疫的作用，鉴于近期有研究报道白藜芦醇可能不直 接通过激活Sirtl而发挥作用，因此其机制是否依赖于Sirtl仍有待进一步探讨。 本文通过对博来霉素诱导的C3H／He小鼠硬皮病模型和3T3／NIH小鼠胚胎成纤 维细胞的研究，阐明Sial及其激动剂白藜芦醇在硬皮病中的抗炎症、抗纤维化 作用，并探讨二者的作用机制。 研究内容与方法 体内研究： 三周，诱导硬皮病小鼠模型。取小鼠背部注射点局部病变皮肤组织，用HE染 色和Masson特殊染色鉴定硬皮病小鼠发病情况，免疫组织化学法和酶联免疫吸 附法(ELISA)检测Sirtl表达的变化。 于不同时间点给予不同剂量的白藜芦醇干预治疗(腹腔注射)硬皮病，每 复旦大学博士论文 日一次，四周后处死小鼠，通过HE染色和Masson特殊染色观察病变皮肤组织 nitricoxide 9，MMP9)、IL-6，诱生型一氧化氮合酶(induced metalloproteinase synthase，iNOS)的表达改变。 体外研究： 应用重组鼠源TNF．Q刺激3T3／NIH小鼠胚胎成纤维细胞，诱导体外细胞炎 症模型；于TNF．a刺激前后的不同时间点给予不同剂量白藜芦醇处理细胞，并 通过明胶酶谱法、Western印迹法和real-time iNOS的表达变化以及NF．r．B亚单位RelA／p65乙酰化水平的改变。 为进一步探索Sirtl炎症抑制作用的具体机制，我们应用siRNA干扰技术 阻断Sirtl在成纤维细胞中的表达，同样条件下再给予白藜芦醇和TNF-a处理 细胞，检测上述炎症相关因子表达水平和RelA／p65乙酰化水平的变化：此外， 对该通路的调节作用。 研究结果 体内研究： 博来霉素诱导的硬皮病小鼠背部病变皮肤的组织学检查可见明显炎症细胞 PCR 浸润，皮肤真皮层变性、增生、纤维化，皮肤厚度增加，胶原沉积；real．time 和免疫组织化学检测发现硬皮病小鼠病变皮肤组织中Sirtl表达水平升高。给予 Sirtl激动剂白藜芦醇治疗后，上述病理病变明显缓解，胶原沉积减少，炎症浸 润缓解，上调的MMP9、IL．6和iNOSmRNA表达也被抑制；白藜芦醇这种抑 制炎症的作用呈剂量和时间依赖性，尤其在博来霉素刺激之前开始给予白藜芦 醇预防治疗，可明显抑制博来霉素诱导的炎症、纤维化反应。 体外研究： 4 中文摘要 IL．6的表达上调，呈时间和剂量依赖性。给予白藜芦醇干预处理细胞后发现： 白藜芦醇可显著抑制TNF．a诱导的MMP9分泌，呈剂量依赖性；同时，白藜芦 mR_NA表达，尤其是在TNF—a刺激