岛津LC-20AT操作规程及其注意事项.docVIP

岛津LC-20AT型HPLC操作规程 在线操作 一、系统组成 工作站，D、W检测器，二元泵（A泵、B泵），色谱柱，流动相。 二、准备 1、准备所需的流动相，用合适的0.45μm滤膜过滤，超声脱气20min。 2、根据待检样品的需要更换合适的色谱柱（注意方向）和定量环。 3、配制样品和标准溶液，用合适的0.45μm滤膜过滤。（注意腐蚀性与有机系的的溶剂） 4、检查仪器各部件的电源线、数据线和输液管道是否连接正常。 三、开机 接通电源，依次开启不间断电源、泵、检测器，待泵和检测器自检结束后，打开打印机、电脑显示器、主机，最后打开色谱工作站。 四、参数设定 1、波长设定：点击视图，选择[显示设置]设置波长。 2、流速设定：简单设置下设置。 五、更换流动相并排气泡 1、将管路的吸滤器放入装有准备好的流动相的储液瓶中； 2、逆时针转动泵的排液阀180°，打开排液阀； 3、按泵的[purge]键，pump指示灯亮，泵大约以9.9ml/min的高流速冲洗，3min（可设定）后自动停止，一般视管路无气泡即可。 4、将排液阀顺时针旋转到底，关闭排液阀。 5、如管路中仍有气泡，则重复以上操作直至气泡排尽。 6、如按以上方法不能排尽气泡，从柱入口处拆下连接管，放入废液瓶中，设流速为5ml/min，按[pump]键，冲洗3min后再按[pump]键停泵，重新接上柱并将流速重设为规定值。 六、平衡系统 1查看基线： 1.1打开“在线色谱工作站”软件， 1.2输入实验信息并设定各项方法参数后， 1.3按下“调零”按钮。 七、进样 1、进样前按软件中[零点校正]按钮校正基线零点。 2、单击[单次运行]，填好名称，选择测定方法，保存途径，点击确定，弹出开始对话框。 2、用试样溶液清洗注射器，并排除气泡后抽取适量即可以进样了，开始对话框自动开始。 3、含量测定的对照溶液和样品供试溶液每份至少进样2次 。 八、谱图的判断及结果计算 系统适用性实验：三个重要指标 ①分离度（加强）：一般应≥1.5。 ②重复性：两次谱图的峰面积应相差不超过1%。 ③理论塔板数：应≥规定的理论塔板数目。 ④拖尾因子：0.95＜T＜1.05 ⑤保留时间：对照与样品的主成分保留时间应大致一致。 ⑥RSD：＜2% 九、清洗管路及进样口 1、分析完毕后，先关检测器和数据处理机，再用经滤过和脱气的适当溶剂清洗色谱系统，正相柱一般用正已烷，反相柱如使用过含盐流动相，则先用水，然后用甲醇-水冲洗，用分析流速冲洗，各种冲洗剂一般冲洗15~30分钟，特殊情况应延长冲洗时间；并且用水冲洗密封圈三次。 离线操作 双击打开图谱文件，单击[方法]，选择[数据分析参数]，单击[program]，可以自行选择积分方式，完成数据参数修改后，单击[视图]，选择[峰表]，出现保留时间，峰面积等参数。 岛津LC-20AT型HPLC注意事项 一、 流动相 1、流动相应选用色谱纯试剂、高纯水或双蒸水，酸碱液及缓冲液需经过滤后使用，过滤时注意区分水系膜和油系膜的使用范围； 2、水相流动相需经常更换（一般不超过2天），防止长菌变质； 二、样品 1、采用过滤或离心方法处理样品，确保样品中不含固体颗粒； 2、用流动相或比流动相弱（若为反相柱，则极性比流动相大；若为正相柱，则极性比流动相小）的溶剂制备样品溶液，尽量用流动相制备样品液； 3、手动进样时，进样量尽量小，使用定量管定量时，进样体积应为定量管的3～5倍； 三、色谱柱 5、色谱柱在不使用时，应用甲醇冲洗，取下后紧密封闭两端保存； 6、不要高压冲洗柱子； 7、不要在高温下长时间使用硅胶键合相色谱柱； 使用过程中注意轻拿轻放。 四、操作过程 1、先以所用流动相冲洗系统一定时间（如所用流动相为含盐流动相，必须先用水冲洗20分钟以上再换上含盐流动相），正式进样分析前30min 左右开启D灯或W灯，以延长灯的使用寿命； 2、建立色谱操作方法，注意保存为自己命名的Method，勿覆盖或删除他人的方法及实验结果； 3、使用手动进样器进样时，在进样前和进样后都需用洗针液洗净进样针筒，洗针液一般选择与样品液一致的溶剂，进样前必须用样品液清洗进样针筒3遍以上，并排除针筒中的气泡； 4、溶剂瓶中的沙芯过滤头容易破碎，在更换流动相时注意保护，当发现过滤头变脏或长菌时，不可用超声洗涤，可用5%稀硝酸溶液浸泡后再洗涤； 5、实验结束后，一般先用水或低浓度甲醇水溶液冲洗整个管路30分钟以上，再用甲醇冲洗。冲洗过程中关闭D灯、W灯； 6、关机时，先关闭泵、检测器等，再关闭工作站，然后关机，最后自下而上关闭色谱仪各组件，关闭洗泵溶液