光动力疗法对Jurkat细胞及HEL细胞作用的研究.pdf

光动力疗法对Jurkat 细胞和HEL 细胞作用的研究 研究生：赵晓燕 导师：黄慧芳 吴勇 中 文 摘 要 目的：探讨新型酞菁类光敏剂ZnPcH 介导的光动力疗法（ZnPcH -PDT ） 1 1 对急性白血病（acute leukemia, AL ）细胞株的杀伤作用，为PDT 应用于AL 自体骨髓体外净化提供理论依据。 方法：以人急性T 淋巴细胞白血病Jurkat 细胞株和人急性红白血病HEL 细胞株作为研究对象，研究ZnPcH 6 1-PDT 对AL 细胞株的杀伤作用。4×10 /ml 的细胞分别与终浓度为0.125、0.25、0.5、1.0µmol/L 的ZnPcH1 共孵育5h， 2 2 用670nm 的激光以38.3mW/cm 的功率密度、1.9J/cm 的能量密度照射，同 时设立 RPMI 1640 空白对照组、光敏剂对照组、光对照组，以排除单纯 ZnPcH1 或单纯光照因素对 AL 细胞的作用。首先采用台盼蓝拒染法、MTT 比色法和集落形成实验等方法检测ZnPcH -PDT 对Jurkat 细胞和HEL 细胞 1 增殖能力的抑制作用；接着应用 AO/EB 荧光染色法、DNA 片段化分析、 Annexin-VFITC/PI 双染流式细胞术等方法分析PDT 作用后Jurkat 细胞和HEL 细胞的死亡方式；最后，运用Western blot 方法检测PDT 作用后AL 细胞株 Akt 蛋白、磷酸化Akt 蛋白（P-Akt ）、P-GSK3β蛋白、P53 蛋白、Bax 蛋白、 热休克蛋白70 （Heat Shock Protein 70 ，HSP70 ）和Bcl-2 蛋白等表达的变化， 旨在初步探讨PDT 杀伤AL 细胞株的分子机制。 结果：①台盼蓝拒染法、MTT 比色法和集落形成实验结果均显示 ZnPcH -PDT 对Jurkat 细胞和HEL 细胞有显著杀伤作用，PDT 对细胞增殖 1 的抑制作用随着光敏剂ZnPcH1 浓度（0.125、0.25、0.5、1.0µmol/L）的增加 而增强（p ﹤0.01 ）；而光对照组、光敏剂对照组的细胞增殖活力与RPMI 1640 空白对照组相比无显著性差别。②AO/EB 荧光染色法显示在PDT 作用后6h， Jurkat 细胞与 HEL 细胞的形态开始改变。随着时间延长，细胞大小、形态 的不均一性逐渐明显；胞核呈致密浓染或碎片黄绿色荧光，凋亡细胞逐渐增 4 加。Jurkat 细胞的形态变化较HEL 细胞更为显著：在PDT 作用后24h ，Jurkat 细胞可见较多的发出黄绿色荧光的细胞核或核碎片，即晚期凋亡的坏死细 胞；在作用后36h，镜下所见到的均是坏死细胞；荧光显微镜下计数结果显 示：PDT 作用后6h、12h、24h 、36h 的4 个时间点，Jurkat 细胞中凋亡细胞 所占的比例分别是 21.4±2.3 ％、57.4±1.3 ％、7.4±1.1 ％、0.8±0.4 ％，坏死细 胞所占的比例分别是10.3±1.5％、15.5±2.3％、71.5±2.4 ％、97.3±1.3 ％；HEL 细胞中凋亡细胞所占的比例分别为 12.9±1.9％、14.5±1.4％、21.1±1.0 ％、 23.4±0.6 ％，坏死细胞所占的比例分别是2.3±0.6 ％、7.1±1.5 ％、8.1±1.6 ％、 20.3±0.4 ％。③DNA 电泳结果显示：ZnPcH1-PDT 作用后6h，Jurkat 细胞就 开始出现典型的DNA 降解“梯状”条带；