动态压力联合IGF-1基因转染促进兔脂肪间充质干细胞成软骨分化和HIF-1α表达的实验研究.pdf

I I I IIIII I I I lIII IIII IIl Y1769206 目 录 一、摘要 中文论著摘要………………………………………………………………………1 英文论著摘要………………………………………………………………………4 二、英文缩略语………………………………………………………………………‘7 三、论文 吾行言…………………………………………………………………………………………………………”8 刖舌…………………………………………………………………………………………………………”6 材料与方法………………………………………………………………………一9 结果………………………………………………………………………………．．23 讨论…………………………………………………………………………………………………………31 结论…………………………………………………………………………………………………………37 四、本研究创新性的自我评价………………………………………………………38 五、参考文献…………………………………………………………………………·39 六、附录 综述…………………………………………………………………………………………………………42 在校期间科研成绩………………………………………………………………51 致{射…………………………………………………………………………………………………………52 个人简介…………………………………………………………………………53 ·中文论著摘要· 动态压力联合IGF．1基因转染促进兔脂肪间充质干细 胞成软骨分化及HIF．1a表达的实验研究 目 的 观察动态机械压力联合IGF．1基因转染对兔脂肪间充质干细胞(ADSCs) HIF．1a表达的影响，并探讨HIF．1a促进成软骨分化的作用机制。 方 法 1、无菌条件下切取成年新西兰大耳白兔颈后部皮下脂肪组织，采用I型胶原 酶消化后贴壁培养的方法，分离、纯化、体外扩增兔ADSCs。 法检测转染后细胞中IGF．1的表达。 3、实验细胞以5x107／ml的密度接种于壳聚糖／明胶复合支架材料上，分组培 养：A组(空白对照组)接种未转染基因的脂肪间充质干细胞，B组(IGF．1组) 接种稳定转染胰岛素样生长因子1的脂肪间充质干细胞，C组(压力组)与D组(压 力+IGF．1组)分别为A、B组的细胞／支架复合物于压力型生物反应器中动态培养 天。 4、观察各组大体形态，比较弹性模量的差异。 5、扫描电镜观察细胞形态和其在支架材料上的贴附伸展情况。 6、MTT法绘制细胞／支架复合物的增殖曲线，并应用Dil荧光标记观察细胞 增殖及分布情况。 7、1，9甲基亚甲蓝(DMMB)法定量测定糖胺聚糖(GAG)含量。 8、Realtime II)和Sox．9基因的相对表达。 结果 l、成功分离、纯化、培养兔ADSCs，贴壁生长后，原代及传代细胞生长状 态良好，形态为长梭性。 后的细胞株在mRNA水平上获得IGF．1的表达。 3、肉眼见压力与IGF．1基因转染联合培养组(D组)的细胞／支架复合物表面 光滑，有光泽，弹性好。弹性模量比较：A组C组B组D组，P0．01。 4、扫描电镜示各组细胞生长旺盛，在支架上附着、伸展良好，其中D组细胞 生长最好，密度较高，形态饱满，细胞成片，可见明显的细胞外基质分泌。 结果与MTT趋势一致，并且发现，在压力培养条件下，细胞分布更为均匀。 6、GAG含量测定结果显示：A组t2组B组D组，其中，D组软骨基质主 要成分卅AG含量明显高于其它各组，Po．01。 7、Realtime PCR结果提示各组细胞／支架复合物中的IGF．1，HIF．1a，II型胶 原和Sox．9基因的相对表达均存在统计学差异，Po．01。实验证实单纯基因转染 组的HIF．1a、Sox．9等