大肠埃希菌超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)基因型鉴定和药敏预测.pdfVIP

．大肠埃希菌超广谱13I．内酰胺酶(ESBLs)基因型 鉴定及药敏预测 硕士生姓名：宋晶 指导教师：徐维家教授 专业名称：临床检验诊断学 摘要 目的：超广谱13-内酰胺酶(Extended．spectrum 蛋白酶的衍生物，它能够水解青霉素、广谱及超广谱头孢菌素和单环p一内酰胺抗 生素的13-内酰胺酶，导致对多种抗生素的耐药性，感染者病死率极高，而且产超广 谱B．内酰胺酶细菌很容易传递扩散，导致对抗生素耐药细菌的广泛传播，危害极 大。因此快速检测产ESBLs细菌及其型别，及早预测出其药敏结果并指导临床用 药具有重要意义。本研究以产超广谱B．内酰胺酶ESBLs大肠埃希菌为目标，采用 毛细管电泳法(CE)，对相应临床分离株耐药酶基因型别进行鉴定。结果证实该法 与传统平板凝胶电泳相比，具有分离速度快，分辨率高等优势，可以借此技术快 速鉴定产ESBLs大肠埃希菌ESBLs基因型别。耐药茵分离出的主要目的通过药敏 试验指导临床抗感染治疗。现行的美国临床实验室标准化协会(CLSI)推荐的药敏试 验提供抗生素的敏感性结果，需要进行至少18小时以上的培养过程，不利于抗感 染治疗的早期诊断。由于气相色谱(GC)具有很强的多组分分离能力，质谱(MS) 具有较强的定性特点，气相色谱质谱联用技术具有两者结合优势是比较显著的， 可以检测代谢产物中的复杂组分。因此本研究拟运用气相色谱质谱联用技术 (GC．MS)，定性定量分析细菌在低剂量头孢他啶刺激下细胞内代谢产物的变化， 达到快速预测产ESBLs大肠埃希菌药敏结果的目的。 ESBLs大肠埃希菌，应用whonet软件分析总体药敏情况，提取大肠埃希菌细菌质粒 基因型别分析。大肠埃希菌培养过程中加低剂量抗菌药物头孢他啶，运用GC-MS 方法，测定细菌胞内代谢产物的含量，采用聚类分析，判断细菌药敏情况。 结果：大连市中心医院对ESBLs大肠埃希菌最敏感的药物是亚胺培南和美罗培 南，敏感率为100％，相对较敏感的抗生素有头霉烯类的头孢西丁，加酶抑制剂的 哌拉西林／他唑巴坦和头孢哌酮／舒巴坦，氨基糖苷类的阿米卡星。40株产ESBLs的 多数是CTX．M型与SHV型或TEM型共同存在的形式；除此之外，有一株扩增产物为 阴性结果。所有菌株的细胞内化合物分析可发现至少1500+化合物离子碎片信息， 经聚类分析，57株耐药茵中，有5株被误判；47株中敏菌中有8株被误判；16株敏 感菌中有2株被误判。总体来说，本研究采用的方法GC-MS方法基本可以将敏感、 耐药和中敏的菌株区分开来。 结论：本文建立的毛细管电泳法可以较快速的鉴别产ESBLs大肠埃希菌的基 因型别，通过GC．MS方法对细菌胞内代谢产物的含量的分析可以达到快速鉴定细 菌药敏情况的目的，为临床快速药敏预测提供了一种崭新的方法。 基因型色谱质谱代谢产物 关键词：超广谱p．内酰胺酶(ESBLs) in and ofESBLGeneEscherichiacoli RapidGenotyping resistance Drug prediction Master degree candidate：SongJing iaXu Supervisor：ProfessorWeij Major：ClinicalLaboratory Abstract Objective：Extended 13-Lactamases， spe