大肠癌相关成纤维细胞的原代培养和其糖代谢特征.pdfVIP

本课题得到： 国家自然科学基金资助项目：资助； 江苏省教育厅研究生科研创新计划资助项目：（CXZZ11_0122）资助； 江苏省医学重点人才项目及苏州市科技发展计划资助项目： （SYS201031）资助。 大肠癌相关成纤维细胞的原代培养及其糖代谢特征 中文摘要 大肠癌相关成纤维细胞的原代培养及其糖代谢特征 中文摘要 目的：比较大肠癌肿瘤相关成纤维细胞（CCAFs ）的不同原代培养方法，筛选最 佳培养条件。探索CCAFs 不同于正常成纤维细胞的糖代谢特征。 方法：高浓度双抗低温处理大肠癌标本；12d 细胞计数法比较酶消化法与组织块 植入法的CCAFs 培养效率；利用6d 贴壁率及12d 爬出细胞数法比较不同组织块大小 3 3 （1mm ，8mm ）、培养基种类（1640，DMEM ，F12 ）、培养瓶材质（玻璃瓶，塑 料瓶）与血清浓度（10%，20% ）的培养效率；所获CAFFs 行免疫荧光鉴定并绘制生 18 长曲线；从免疫组化、免疫荧光、 F-FDG 摄入率、乳酸测定、western blot 等方面比 较出 CCAFs 的糖酵解特征并测定肿瘤细胞对 CCAFs 的糖酵解特征的影响。结果以 SPSS 18.0 软件进行统计分析。 结果：1.组织块植入法与酶消化法原代培养的 12d 细胞计数分别为9.75 ±0.91 × 4 4 10 与 1.83 ±1.22 ×10 （t=13.733 ，p=0.000 ）；12d 细胞计数法提示高血清浓度 （t=-3.549,P=0.0055 ），较大组织块（t=-1.115，P=0.01 ）可增加细胞培养效率；与 F12 与DMEM 比较，1640 培养基具有更高细胞培养效率和性价比，其回归方程为： Y=10.68750-3.96528X -2.00694X +1.03472X ；培养瓶材质不影响细胞数量（t=-0.116， 22 3 4 P=0.910 ）；6d 细胞爬出率与培养瓶和培养基有关，回归方程为 Y=0.81367+0.20478X -0.33312X ；2.原代培养的CCAFs 特异性表达SMA- α及MCT4 ， 1 2 18 肿瘤细胞则表达MCT1 ，CCAFs 以及肿瘤细胞诱导的CCAFs 均表现为高 F-FDG 摄 入和高乳酸排出，且在生长方面明显快于CNFs 。 结论：高浓度双抗低温处理组织标本，以含高浓度胎牛血清的 1640 培养基，采 用大组织块植入法是CCAFs 原代培养的优化方法，获得的CCAFs 具有典型CAFs 特 征。肿瘤细胞诱导成纤维细胞活化，增加CCAFs 的葡萄糖摄取与糖酵解能力，并释 放酸性的、富含能量的乳酸进入细胞间质，为肿瘤细胞的增殖、转移提供能量并营造 I 中文摘要 大肠癌相关成纤维细胞的原代培养及其糖代谢特征 适于肿瘤细胞生长的酸性环境。 关键词：大肠癌相关肿瘤成纤维细胞 ；原代培养；MCT1 ；MCT4 ；糖酵解 作 者：彭 巍 指导老师：吴永友 副教授 II Primary culture of human colorectal carcinoma associated fibroblasts and their metabolic characteristics Abstract Primary culture of human colorectal carcinoma asso