宫颈细胞HPV16病毒DNA甲基化及宫颈病变相关性研究.pdfVIP

Y1 目录 缩略词表………………………………………………………………………………．3． 中文摘要………………………………………………………………………………．4． 研究背景和目的…………………………………………………………………．．4． 研究方法和步骤…………………………………………………………………．．4． 结果…………………………………………………………………………………………………………．．5． 结论…………………………………………………………………………………………………………．．5． 关键词………………………………………………………………………………．5． AbstraCt………………………………………………………………………………………………………．．．6． and BackgroundO场ectiVes…………………………………………………………………………-6- Materialand Methods…………………………………………………………………………………．6． Results………………………………………………………………………………………………………．7． Conclusions………………………………………………………………………………………………．．7． words…………………………………………………………………………………………………-8- Key 日U舌………………………………………………………………………………………………………………．-9l- 前言…………………………………………………………………………………………………………一．9． 材料与方法……………………………………………………………………………．12． 结果……………………………………………………………………………………………………………一．20． 讨论……………………………………………………………………………………………………………．．．36． 全文总结……………………………………………………………………………．．42． 参考文献……………………………………………………………………………．．．44． 综：述……………………………………………………………………………………………………………．．．47． 致谢……………………………………………………………………………………………………………．．．53． ．2- 缩略词表 宫颈细胞HPVl6病毒DNA甲基化与宫颈病 变相关性研究 中文摘要 研究背景和目的： 染是宫颈癌的主要病因。表观遗传学事件在癌症的发生过程中起着重要的作用，几 乎所有的癌症类型均表现出异常的甲基化状况，且涉及全基因组。本研究旨在分析 临床样本中HPVl6病毒长控制区增强子(LCREnh锄cer)和E6基因启动子(E6 37、43、52、58)的甲基化图谱，结合患者的临床资料，分析病毒DNA甲基化程 度差异与临床病变程度的相关性，初步探讨甲基化程度差异与宫颈癌发生发展的关 系，为今后从分子生物学、表观遗传学角度阐明HPV致病机制，进而预测患者宫 颈病变的进展及预后等相关问题提供研究基础。 研究方法和步骤： 的宫颈病变及常规妇科检查的患者，一共收集TCT标本324例，其中HPV感染244 例，用多对引物PCR扩增分型后确定单一型别HPV感染146例，混合感染98例。 例)。在对原始标本提取DNA后，从单一邯V16感染中选择26例、从混合感染中 选择4例(HPVl6感染为主，细胞学诊断均为正常)，总计30例样本纳入全程研究。 另从医科院基础所细胞中心购得SiHa细胞系l株作为平行对照。SCC组全部病例 和HSIL组部分病例有北京协和医院病理科的病理诊断。 从原始样本中提取DNA，然后用试剂盒对提取的DNA行重亚硫酸盐修饰，再 用BSP引物PCR扩增目的片段，在电泳验证目的片段存在后，将PCR产物质粒转化 E．．coli克隆，随机挑取数个克隆，对目的片段进行测序，从而确定目的片段中每一 个CpG位点的甲基化状况。