川崎病急性期血浆中差异表达microRNAs的筛选和可能的作用机制.pdfVIP

川崎病急性期血浆中差异表达microRNAs 的筛选及可能的作用机制 中文摘要 川崎病急性期血浆中差异表达microRNAs 的筛选及可能的作用机制 中文摘要 第一部分 川崎病 儿急性期血浆中差异表达microRNAs的筛选研究 目的：利用microRNA （miRNA）微阵列芯片技术筛选川崎病（Kawasaki disease, KD）急性期血浆中差异表达的miRNAs ，发现与川崎病血管炎症相关的miRNAs ，进一 步探讨KD血管炎症的发生机制。 方法：选取苏州大学附属儿童医院就诊的急性期KD患儿6例，及健康儿童6例作为 对照，清晨抽取空腹血，分离血浆，提取血浆中总RNA，采用miRNA芯片杂交技术检 测川崎病组及正常对照组血浆中差异表达的miRNAs 。再选取急性期KD患儿及健康 儿童各8例，采用实时定量PCR （real-time quantitative PCR，RT- qPCR）技术验证芯片结果。利用TargetScan, PITA 和microRNAorg三个数据库对差异miRNAs进行靶基因预测，使用DAVID生物信息学 分析软件对共同的靶基因进行GO和KEGG分析，寻找与KD血管炎症相关的靶基因。 结果：miRNA芯片在KD急性期血浆中筛选到7个显著上调的miRNAs （hsa-let-7b- 5p, hsa-miR-223-3p, hsa-miR-4485, hsa-miR-4644, hsa-miR-4800-5p, hsa-miR-6510- 5p和hsa-miR-765）和3个显著下调的miRNAs (hsa-miR-33b-3p, hsa-miR-4443 和hsa- miR-4515) 。结合RT-qPCR验证结果，发现hsa-miR-223- 3p表达显著性上调与芯片结果一致。靶基因预测分析共获得415个共同的靶基因，使 用DAVID软件分析发现与炎症有关的靶基因共7个，分别为IL6ST 、F3、 SMAD1、HDAC9 、NLRP3 、EPHA3和HHEX。 结论：结合芯片技术与RT- qPCR技术我们获得KD急性期血浆中差异表达的miRNAs 。hsa-miR-223- 3p可能参与了KD血管炎症的病理生理过程。 I 川崎病急性期血浆中差异表达microRNAs 的筛选及可能的作用机制 中文摘要 II 川崎病急性期血浆中差异表达microRNAs 的筛选及可能的作用机制 中文摘要 第二部分 川崎病血浆中hsa-miR-223-3p 的表达 与IL-6水平的相关性研究 目的：分析hsa-miR-223-3p 和IL-6在KD 中的表达及其临床意义，并探讨hsa-miR- 223-3p与IL-6之间的关系。 方法：选择30例KD患儿，其中冠状动脉损伤者10例，非冠状动脉损伤者20例。发 热及正常对照组各12例。采用RT-qPCR技术检测KD急性期和亚急性期血浆中hsa- miR-223-3p 的表达量，采用酶联免疫吸附实验（enzyme-linked immunosorbent assay ，ELISA）法检测血浆中IL-6水平，比较各组间差异，并分析hsa-miR-223-3p与IL- 6的相关性。 结果： 1. KD组急性期血浆hsa-miR-223- 3p的表达量显著高于对照组（p 0.05）；KD冠脉损伤组hsa-miR-223- 3p的表达量显著低于KD无冠脉损伤组（p 0.05）。KD组亚急性期血浆hsa-miR-223- 3p的表达量明显减少，与对照组间差异无统计学意义（p 0.05）。 2. KD组急性期血浆IL-6水平明显高于对照组（p 0.05）；KD冠脉损伤组IL- 6水平明显高于KD无冠脉损伤组（p 0.05）；KD