干扰eIF4E基因对三阴乳腺癌细胞生物学行为及化疗敏感性的影响.pdfVIP

中山大学硕一l：论文 干扰eiF4E基冈对三阴乳腺癌细胞生物学行为与化疗敏感性的影响 干扰eIF4E基因对三阴乳腺癌细胞生物学行为 与化疗敏感性的影响 专业：肿瘤学 硕士生：周菲菲 导师：夏良平副教授 中文摘要 背景与目的：三阴乳腺癌是一种特殊类型的乳腺癌，与非三阴乳腺癌相比预后 差，对内分泌治疗反应不佳，临床无有效靶向治疗药物。目前针对三阴乳腺癌 的靶向药物临床研究较少，疗效及安全性尚不确定，因此，寻找新的靶点，开 发新的更为安全有效的分子靶点药物，将为治疗三阴乳腺癌带来光明的前景。 真核起始因子4E(eiF4E)是真核细胞翻译起始因子，在蛋白质的翻译起始阶 段起重要作用，并且与多种恶性肿瘤的发生、发展、浸润密切相关。已有研究 表明elF4E在乳腺癌包括三阴乳腺癌中高表达，与其预后有显著相关性，并与 乳腺癌的化疗或放疗的敏感性显著相关，从而可能成为乳腺癌靶向治疗的新靶 点。目前，elF4E基因对三阴乳腺癌细胞生物行为影响的研究尚缺乏，本研究 旨在阐明下调elF4E基因表达后三阴乳腺癌细胞生物学行为的改变，包括细胞 周期的影响、细胞侵袭迁移的影响、化疗药物敏感性的影响及可能机制等，为 其作为三阴乳腺癌治疗的新靶点提供理论基础。 l 细胞(三阴乳腺癌细胞)，通过Western blotting法检测elF4E蛋白表达，评价干 扰效率，选择最有效的干扰转染细胞株进行试验。克隆形成实验、TransweU实 验观察瞬时干扰前后三阴乳腺癌MDA．MB．23 l细胞增殖能力、侵袭转移能力变 化；流式细胞术观察细胞周期变化；MTT法观察干扰前后细胞对化疗药物(顺 铂、阿霉素、紫杉醇、多西他赛)敏感性变化；Western blotting法检测干扰前 后MDA．MB一23l细胞中Bax、Bcl．2、p53和p2l蛋白表达的变化。 c扣山人学硕．J二论文 干扰elF4E基冈对三阴乳腺癌细胞生物学行为与化疗敏感性的影响 胞，瞬时转染siRNA_eIF4E三阴乳腺癌MDA—MB．23I和MDA．MB-435细胞，两种 方法均可明显抑制上述细胞中elF4E蛋白的表达；克隆形成实验及流式细胞术表 明：干扰elF4E表达使MDA．MB一23 l细胞阻滞在G1期，细胞处于增生不活跃状 态，明显抑制细胞增殖；Transwell实验显示：干扰elF4E表达可能导致三阴乳腺 包括顺铂、紫杉醇、阿霉素、多西他赛等化疗药物对三阴乳腺癌MDA．MB．23l 细胞的敏感性：Western 导p53和p21的表达上调，同时明显增加促凋亡蛋白Bax蛋白表达，而显著减少抗 凋亡蛋白Bcl一2蛋白表达，即凋亡相关蛋白Bax／Bcl．2比例明显升高。 结论： l、成功构建elF4E靶向shRNA表达质粒，应用此质粒转染三阴乳腺癌 MDA．MB-435细胞；两种方法均有效抑制elF4E基因蛋自水平表达，为后续的 研究提供了有力的工具。 2、干扰elF4E基因表达使三阴乳腺癌细胞阻滞在Gl期，细胞处于增生不活跃 状态，可显著地抑制细胞增殖和细胞侵袭转移能力。 3、干扰elF4E基因表达可增强包括顺铂、紫杉醇、阿霉素、多西他赛等化疗药 物对三阴乳腺癌细胞的敏感性，其机制可能是诱导p53和p21的表达、调节凋 亡相关蛋白Bax／Bcl一2而实现的。 l细胞株；化疗敏感性 关键词：三阴乳腺癌；elF4E；MDA．MB．23 H 中山大学硕l：论文 干扰elF4E基冈对三阴乳腺癌细胞生物学行为与化疗敏感性的影响 elF4E cell and Knockdownof s