氟尿嘧啶类药物抑制胸苷磷酸化酶(TP)表达的胃癌细胞增殖机制的探究.pdfVIP

·中文论著摘要· 氟尿嘧啶类药物抑制胸苷磷酸化酶(TP)表达的胃癌细 胞增殖机制的研究 目 的 胃癌是世界范围内最常发生的恶性肿瘤之一，在我国是肿瘤死亡的主要原因。 大多数患者在诊断时已是进展期或发生远处转移，化疗是治疗晚期胃癌的主要手 段。 氟尿嘧啶是胃癌化疗的基本用药，其药理作用为通过DNA和RNA两种途径， 干扰胸腺嘧啶的合成。其中，DNA途径是氟尿嘧啶在胸苷磷酸化酶的催化下直接 合成活性代谢产物胸腺嘧啶脱氧核苷(FdUMP)，进而影响细胞DNA的合成。 卡培他滨、去氧氟尿苷等氟尿嘧啶前体药物在体内也需经胸苷磷酸化酶催化 转变为氟尿嘧啶，进而发挥生物学效应。 本实验以胃癌细胞株SGC7901、MGC803为模型，对氟尿嘧啶类药物的抗瘤 活性及与胸苷磷酸化酶表达水平的关系进行了研究。 方 法 1、MTT法检测去氧氟尿苷对两种胃癌细胞的增殖抑制 取对数期生长的人胃癌MGC803细胞，SGC7901细胞，进行胰蛋白酶消化， 消化后用培养液制成单细胞悬液，调整细胞浓度至5x104个／ml接种于96孔板，培 养12d时后分别加入既定浓度的去氧氟尿苷，每孔最终体积200I．tl，加药分别培养 长检测光密度值(optical 平行孔的平均OD值作为各组的OD值。 2、Western Blot检测两种胃癌细胞胸苷磷酸化酶表达水平 收集人胃癌MGC803细胞和SGC7901细胞进行WesternBlot检测，加入抗 5min，曝光，显影，定影。 3、MTT法分别检测去氧氟尿苷和氟尿嘧啶对SGC7901细胞的增殖 抑制 取对数期生长的SGC7901细胞，进行胰蛋白酶消化，消化后用培养液制成单 细胞悬液，调整细胞浓度至5x104个／ml接种于96孔板，培养12d,时后分别加入既 定浓度的去氧氟尿苷和氟尿嘧啶，每孔最终体积200pl，加药分别培养48d,时，72 小时后，加入MTT，于相同培养条件下继续培养4h。加入DMSO，在恒温振荡器 各组的OD值。 4、细胞凋亡检测 取对数期生长的SGC7901细胞，进行胰蛋白酶消化，消化后用培养液制成单 细胞悬液，调整细胞浓度至3x105个／ml接种于6孔板，培养12d,时后分别加入既定 浓度的去氧氟尿苷和氟尿嘧啶。24dx时，48d时候分别收集对照组及处理组细胞， 进行检测，判定凋亡百分率。CELLQuest软件进行分析。 5、Western Blot检测药物作用后细胞胸苷磷酸化酶的表达 分别收集对照组及处理组细胞进行裂解，提取细胞蛋白，取20lag处理后的蛋 中用X片曝光，显影，定影。 结果 1、高表达胸苷磷酸化酶的细胞系筛选 后，SGC7901细胞的增殖抑制明显强于MGC803细胞。通过WesternBlot检测， 在SGC7901细胞中，胸苷磷酸化酶表达水平明显较MGC803细胞高 2 2、氟尿嘧啶与去氧氟尿苷对SGC7901细胞的增殖抑制 通过进行MTT检测，发现无论是氟尿嘧啶还是去氧氟尿苷，对SGC7901细胞 的增殖抑制都随着时间的延长、浓度的加大而逐渐增强。 3、氟尿嘧啶与去氧氟尿苷对SGC7901细胞的凋亡诱导 流式细胞仪分析显示，氟尿嘧啶和去氧氟尿苷能诱导SGC7901细胞凋亡，且 呈时间剂量依赖性。 4、氟尿嘧啶与去氧氟尿苷对SGC7901细胞胸苷磷酸化酶表达水平 的影响 通过WestemBlot检测，在药物处理过的SGC7901细胞中，胸苷磷酸化酶的 含量较对照组细胞明显上调，而且呈时间剂量依赖性。 结论 1、去氧氟尿苷能抑制胃癌细胞增殖，诱导胃癌细胞的凋亡，其作用受细胞胸 苷磷酸化酶表达水平的影响。 2、氟尿嘧啶和去氧氟尿苷能上调胃癌细胞内胸苷磷酸化酶的表达水平。 关键词 氟尿嘧啶；去氧氟尿苷；胸苷磷酸化酶；胃癌 3